細(xì)菌的耐藥表型是細(xì)菌耐藥機(jī)制的外在表現(xiàn),細(xì)菌的耐藥機(jī)制只要有產(chǎn)生滅活酶、通透障礙、外排、靶位修改這四種,但是他們的外在表現(xiàn)卻有很多種,他們?cè)趺礄z測(cè)呢?下面我就介紹幾種常見(jiàn)的耐藥表型及檢測(cè)方法。
-內(nèi)酰胺酶
是一類(lèi)水解青霉素、頭孢菌素類(lèi)抗生素的滅活酶;該酶位于革蘭陽(yáng)性球菌菌體外,革蘭陰性桿菌間質(zhì)中;檢測(cè)方法有微生物培養(yǎng)法、碘-淀粉法、頭孢硝噻吩紙片法。頭孢硝基噻吩顯色法(Nitrocefin):制配紙片 滅菌水濕潤(rùn) 涂測(cè)試菌于紙片上,10min觀(guān)察紙片顏色,顯紅色為陽(yáng)性(葡萄球菌應(yīng)放置1h內(nèi)觀(guān)察)。
儀器法:Vitek、Microscan的藥物測(cè)試卡中均帶有檢酶功能。
如果青霉素的藥敏結(jié)果出現(xiàn)以下情況,需要做誘導(dǎo) -內(nèi)酰胺酶的檢測(cè):MIC 0.12 g/ml ;Zonediameter 29 mm。
接種純菌落于瓊脂上;貼 -內(nèi)酰胺類(lèi)紙片 (例如,苯唑西林, 頭孢西丁);孵育隔夜;測(cè)試抑菌圈周?chē)募?xì)菌;如果 -內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性,報(bào)告青霉素R。
AmpC酶
是在革蘭陰性菌中發(fā)現(xiàn)的由染色體或質(zhì)粒介導(dǎo)的水解頭孢菌素的Ⅰ型 內(nèi)酰胺酶,可分為誘導(dǎo)酶和非誘導(dǎo)酶,與ESBLs不同的是,AmpC酶對(duì)三代頭孢菌素耐藥但對(duì)四代頭孢菌素敏感且不被酶抑制劑克拉維酸所抑制,但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。
頭孢西丁三維試驗(yàn)是檢測(cè)AmpC酶的經(jīng)典方法:將標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 25922按常規(guī)藥敏紙片K-B法操作均勻涂布于M-H平板上,在M-H平板中心貼一片頭孢西汀(30ug/片) 紙片,在距紙片邊緣25px處,用無(wú)菌手術(shù)刀片切75px長(zhǎng)度的小槽,將待測(cè)菌株的6個(gè)菌落接種于槽內(nèi)(勿溢出槽外),35℃孵育18-24h,結(jié)果觀(guān)察:若抑菌圈向內(nèi)凹陷,即AmpC酶陽(yáng)性。除此之外,還有以硼酸化合物為抑制劑檢測(cè)肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、頭孢西丁瓊脂基礎(chǔ)法等。
超廣譜 -內(nèi)酰胺酶(ESBLs)
ESBLs是指由質(zhì)粒介導(dǎo)的能水解青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)和單環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)氨曲南的一類(lèi)酶;ESBLs不能水解頭霉素類(lèi)和碳青霉烯類(lèi)藥物,能被克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦等酶抑制劑所抑制;ESBLs主要見(jiàn)于大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌,此外也見(jiàn)于腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、沙雷菌屬等其他腸桿菌科細(xì)菌、不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌。
紙片法,出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生ESBL (篩選陽(yáng)性):頭孢泊肟 17mm,頭孢他啶 22mm,頭孢噻肟 27mm,頭孢曲松 25mm,氨曲南 27mm 紙片法(表型確認(rèn)試驗(yàn))頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。
任一復(fù)方制劑的抑菌圈直徑與相應(yīng)單藥抑菌圈直徑相差 5mm時(shí),即可判斷該菌產(chǎn)ESBL。
儀器測(cè)定法:Vitek,和BD-PHOEMXTM微生物分析儀均可測(cè)試ESBLS。
分子生物學(xué)技術(shù)(PCR、DNA探針等)及分析酶底物譜及抑制物譜、生物化學(xué)技術(shù)等檢測(cè)技術(shù)可對(duì)ESBLS做出確診。
(來(lái)源:卡邁舒(上海)生物科技有限公司)
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