土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

S-PPO 主要來(lái)源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放，催化土壤中芳香族

化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機(jī)質(zhì)和色素，

完成土壤芳香族化合物循環(huán)，用于土壤環(huán)境修復(fù)。

測(cè)定原理：

S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì)，后者在430nm 有特征光吸收。

自備用品：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、（不

允許快遞）、蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一：粉劑 2 瓶，4℃保存；臨用前取一瓶加入15mL 蒸餾水，用不完的試劑4℃保存一周；

試劑二：液體12mL 1 瓶，4℃保存；

試劑三：50mL 2 瓶，4℃保存；（自備）

樣品處理

新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50 目篩。

測(cè)定步驟

試劑名稱 測(cè)定管

風(fēng)干土樣（g） 0.05

試劑一（ L） 500

振蕩混勻，30℃恒溫培養(yǎng)1 h

試劑二（ L） 200

試劑三（ L） 1750

振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，用蒸餾水調(diào)零，取1mL 上層液于430nm 處測(cè)定吸光值A(chǔ)。

（注意：1、因粘度小，易掉液，吸取前需先將槍頭在上層液里潤(rùn)洗 2~3 次，再轉(zhuǎn)移測(cè)

定；2、易揮發(fā)，轉(zhuǎn)移到 96 孔板后立即測(cè)定，一個(gè)一個(gè)測(cè)定）。

S-PPO 活力計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.97x -0.003；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值A(chǔ)。

單位的定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒(méi)食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-PPO 活力（mg/d /g 土樣）＝(A+0.003)  8.97 V 反總 W T=131 (A+0.003)

T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積2.45mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

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