區(qū)分活細胞和死亡細胞的關鍵在于死亡細胞膜轉(zhuǎn)運功能及膜完整性的喪失。許多陽離子染料，如臺盼藍、碘化丙錠（PI）、溴化乙錠（EB）以及7-氨基放線菌素D（7-ADD）等，常被用于檢測細胞的存活率。活細胞由于膜具有完整性而不被著色，死亡細胞（如壞死細胞或晚期凋亡細胞）由于其膜完整性的喪失而被著色。
實驗方法原理   
實驗步驟   
1. 主要試劑的的配制
碘化丙錠（PI）染色液（4℃ 避光保存）：Pl，100 g/ml；TritonX-100，1.0%；NaCl 0.9%。

2. 操作流程
2.1 樣本的準備

2.1.1 培養(yǎng)細胞收集懸浮細胞于 Eppendorf 管中。貼壁細胞用胰蛋白酶消化后制成單細胞懸液，1000r/min離心 5 min。

2.1.2 新鮮實體組織取材組織用 PBS 漂洗干凈后，浸泡在含 PBS 的平皿或青霉素小瓶內(nèi)，用眼科剪盡可能將組織剪碎，吸去上清液，組織塊轉(zhuǎn)入大瓶中加入 10～20 ml 酶（200 g/ml膠原酶），37℃ 消化 30 min，在不銹鋼網(wǎng)上輕輕研磨，使組織和細胞分離，用 200 目篩網(wǎng)過濾 2 次。

2.1.3 石蠟切片組織切 50 m 厚切片 4 張，置玻璃試管中，加二甲苯 5 ml，脫蠟 3 5 min，無水乙醇洗3 5 min，蒸餾水洗 5 min，加 2 ml 0.5% 胃蛋白酶（pH 1.0），振蕩消化 30 min，PBS 洗終止消化，后用 200 目篩網(wǎng)過濾2次。

2.2 染色方法
制備好的單細胞懸液可用70% 乙醇固定，4℃ 保存?zhèn)溆?。染色前用PBS稀釋單細胞，離心沉淀，棄上清，加入 200 l RNA 酶 A，37℃ 水浴30 min，再加入 800 l PI 染色液，混勻，4℃ 避光孵育 30 min。

2.3 上機檢測記錄
激發(fā)波長 488 nm 處紅色熒光。

3. 結(jié)果觀察
細胞凋亡時，G1 峰左側(cè)出現(xiàn)亞二倍體細胞群的峰型。在光散射圖譜上，前向光散射低于正常，側(cè)向光散射高于正常。細胞壞死時，細胞周期中的細胞均出現(xiàn)不同程度的減少，亞二倍體細胞量多少不等。在光散射圖譜上，的向光散射和側(cè)向光散射均高于正常。

關注本網(wǎng)官方微信 隨時閱讀專業(yè)資訊