檢測原理： 

◆ Cell Counting Kit簡稱CCK8,（CCK-8/WST-8）試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

◆ WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。

◆ CCK法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

CCK方法的優(yōu)勢： 

◆ 表1 CCK法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較

檢測方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK法

甲臜產(chǎn)物的水溶性

差（需加有機溶劑溶解再檢測）

好

好

好

產(chǎn)品性狀

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

現(xiàn)配現(xiàn)用

即開即用

即開即用

檢測靈敏度

高

很高

很高

高

檢測時間

較長

較短

較短

zui短

檢測波長

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

細胞毒性

高，細胞形態(tài)完全消失

很低，細胞形態(tài)不變

很低，細胞形態(tài)不變

很低，細胞形態(tài)不變

試劑穩(wěn)定性

一般

較差

一般

很好

批量樣品檢測

可以

非常適合

非常適合

非常適合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

◆ 酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；

◆ 細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到zui佳測定時間。關(guān)于不同細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇關(guān)于不同細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇，請參考

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：

實驗一：細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液（100 L/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）。

2、向每孔加入10 L CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 L 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

實驗二：細胞增殖-毒性檢測

1、在96孔板中配置100 L的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。

2、向培養(yǎng)板加入10 L不同濃度的待測物質(zhì)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。

4、向每孔加入10 L CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。

5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 L 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

活力計算：

細胞活力*（％）=[A（加藥）-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] 100
A（加藥）：具有細胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

保存條件：

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。

產(chǎn)品報價：

貨號

名稱

產(chǎn)地

規(guī)格

報價（元）

庫存

QF0025

CCK-8（wst-8）

YEASEN

100次/1ml

150

是

QF0026

CCK-8（wst-8）

YEASEN

500次/5ml

480

是

QF0027

CCK-8（wst-8）

YEASEN

1000T/10ml

897

是

QF0028

CCK-8（wst-8）

YEASEN

3000T/30ml

1687

是

QF0029

CCK-8（wst-8）

YEASEN

10000T/100ml

4897

是