用于免疫檢測的所謂 標準曲線"其實稱為擬合曲線比較適合。免疫檢測時標準點(可所以倍比稀釋的,也能夠不是)濃度假如和相應的吸光度(OD)值假如能夠呈現(xiàn)直線聯(lián)絡當然是zui志向的了,這時能夠通過EXELL等便當?shù)墨@得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么志向的情況,標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線聯(lián)絡,這時就不能用直線擬合的方法了,而對擬合方法進行選擇就是必要的了。
關于標準曲線的擬合方法,直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合,但都只適用于曲線的一部分,有的適用于前半段,有的適用于后半段,有的適用于中心一段,而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的適用性。當然,假如用于定量,仍是在中心一段較好。這些方法盡管沒有一種方法能夠通用,但也都能夠用。關鍵在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分,你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程很好的擬合,中低濃度部分能夠用直線方程,中心部分可用對數(shù)方程,而中后段可用四參數(shù)。
其實,在一個長的區(qū)間內(nèi),Logistic應該都能擬合得較為志向。但并不是說它就是的?,F(xiàn)實上不僅是ELISA,其它許多生物學反應都是S形曲線,也都能夠用Logistic曲線擬合。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。假如用來定量,S形曲線的中心段(較陡處)是比較好的,而兩端的平 坦部分計算誤差會大,有時甚至會很大。
現(xiàn)在國際上zui盛行的免疫檢測擬合方法是 四參數(shù)邏輯擬合",用這種擬合方法往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線聯(lián)絡,然后進一步比較正確的獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。
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