產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
儲(chǔ)存
價(jià)格(元)
PI (Propidium Iodide) 碘化丙啶
40711ES10
10mg
4 C避光保存
189.00
PI (Propidium Iodide) 碘化丙啶
40711ES60
100mg
4 C避光保存
1155.00
產(chǎn)品描述
碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種常用的細(xì)胞核熒光染料,作為一種溴化乙錠(EB)的類似物,能夠嵌入堿基之間實(shí)現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性,大約每4-5個(gè)DNA堿基對(duì)結(jié)合一個(gè)染料。PI也能與RNA結(jié)合,需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的zui大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合,熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)20-30倍,zui大激發(fā)波長(zhǎng)向紅色波段遷移~30-40nm,zui大發(fā)射波長(zhǎng)向藍(lán)色波段遷移~15nm,從而使其zui大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)變?yōu)?35/617nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對(duì)比較低,但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時(shí)檢測(cè)核酸DNA和熒光標(biāo)記抗體,只需要使恰當(dāng)?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡,共聚焦顯微鏡,流式細(xì)胞儀以及熒光計(jì)分析。PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外,但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。利用這一特性,通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用,同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定,用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑,兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù),包括直接或者間接的熒光抗體檢測(cè),mRNA原位雜交,細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測(cè)法以及組織染色。PI的單獨(dú)染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測(cè)。產(chǎn)品性質(zhì)
英文同義名(English synonym)
2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide.
CAS號(hào)(CAS NO.)
25535-16-4
分子式(Formula)
C27H34I2N4
分子量(Molecular Weight)
668.4
外觀(Appearance)
暗紅色結(jié)晶
純度(Purity)
95% by HPLC
溶解性(Solubility)
溶于水(1mg/ml)
熒光光譜 (Fluorescence Spectral)
水溶液,PI的Ex/Em= 493/636nm;PI-核酸的Ex/Em= 535/617nm;熒光可用氙氣燈,泵弧燈或者488nm氬離子激光激發(fā)。通常情況下,用流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè)。
結(jié)構(gòu)式(Structure)
運(yùn)輸與保存方法
冰袋(wet ice)運(yùn)輸。4 C避光保存,至少一年穩(wěn)定。
使用方法
儲(chǔ)存液的配制稱取1mg PI粉末(M. Wt= 668.4),用1ml去離子水充分溶解后配置成1mg/ml(1.5 mM)的儲(chǔ)存液。4 C避光保存,至少6個(gè)月穩(wěn)定。
貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟(熒光顯微鏡檢測(cè))樣本準(zhǔn)備:根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞。PI染色一般在其它染色完成后再進(jìn)行。PI復(fù)染要求細(xì)胞經(jīng)透化處理。RNase酶處理:若樣本使用多聚甲醛,甲醛或者戊二醛固定,則需要進(jìn)行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定,通常不需要此步操作。a,于2 SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本;b,將本品置于含有100 g/mL DNase-free RNase的2 SSC溶液中37 C孵育20min;c,用2 SSC溶液清洗樣本3次,每次1min。復(fù)染:a,于2 SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本;b,直接用2X SSC稀釋1mg/ml(1.5 mM)PI儲(chǔ)存液 1:3000,得到500 nM的PI工作液。通常添加300 L染液足夠用于一個(gè)蓋玻片細(xì)胞制片。染色1-5min。c,2 SSC清洗幾次,流盡多余的緩沖液后,加入抗淬滅劑封片(比如Yeasen,貨號(hào):36308ES08)。d,選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。懸浮細(xì)胞復(fù)染步驟(流式細(xì)胞儀檢測(cè))樣本準(zhǔn)備:根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞?;蛘呤褂萌缦碌牟襟E:收集一定量的細(xì)胞,密度約 2 105 ~1 106。離心收集細(xì)胞,吸掉上清液,用手輕彈管壁就剩下的液體重懸細(xì)胞。之后加入1ml常溫存放的PBS;
將所有的重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移到4ml于-20 C預(yù)冷的無水乙醇,在高速渦旋混勻的同時(shí)一邊用槍緩慢的添加細(xì)胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20 C乙醇中固定5-15min。
離心收集細(xì)胞,除去乙醇。用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后,加入5ml室溫的PBS。允許細(xì)胞水化15min;復(fù)染用染色液(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet P-40)稀釋1mg/ml(1.5 mM)PI儲(chǔ)存液 1:500,得到3 M的PI工作液。1ml的PI染色液足夠用于每個(gè)細(xì)胞樣本的檢測(cè)。注:工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整,也可以直接使用PBS,HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲(chǔ)存液到需要的濃度。
樣本制備的zui后一步后離心收集細(xì)胞,去除上清,用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后,加入1ml的PI染色工作液。室溫孵育15min后,流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分析。若用流式顯微鏡觀察,則需要離心樣本,去除上清并重懸細(xì)胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上,蓋上蓋玻片后觀察。
染色質(zhì)FISH復(fù)染步驟樣本準(zhǔn)備:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟制備樣本。復(fù)染之前的zui后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖鹽。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。復(fù)染工作液的配制:用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/ml(1.5 mM)的PI儲(chǔ)存液1:1000,得到1.5 M的PI染色工作液。滴加300 L的工作液直接到樣本。有必要的話,工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A(終濃度:10 g/mL)。可使用塑料蓋玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min;如
果加入RNase則37 C孵育。
去除蓋玻片,用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料;用吸水紙巾圍繞著樣本周圍吸取殘留液體,蓋上玻璃蓋玻片后用石蠟或者指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進(jìn)行封片。選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。注意事項(xiàng)
碘化丙啶(PI)是已知的誘變劑,因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。相關(guān)產(chǎn)品
40710ES03
PI (Propidium iodide) 碘化丙啶染液(1mg/ml)
1ml
40732ES03
Hoechst 33342 染液(1mg/ml)
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40744ES01
Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒
1Kit
40730ES03
Hoechst 33258 染液(1mg/ml)
1ml
40745ES01
Hoechst 33452/PI 雙染試劑盒
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40728ES03
DAPI染液(5mg/ml)
1mg
40747ES01
Calcein-AM/PI檢測(cè)試劑盒
1Kit