細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)

（1）根據(jù)待測細(xì)胞體積大小選擇合適孔徑的ThinCert。常用的為8.0- m孔徑

（如AGS細(xì)胞），如果細(xì)胞體積較大可以考慮用10- m孔徑；

（2）根據(jù)待測細(xì)胞遷移能力強(qiáng)弱調(diào)整細(xì)胞數(shù)和遷移時(shí)間。常規(guī)24-well 

ThinCert接種細(xì)胞數(shù)約為2 5 104/well，遷移時(shí)間12 36小時(shí)；

（3）由于Greiner公司的24-Transwell內(nèi)含24個(gè)獨(dú)立的ThinCert，為了避免

操作污染，每次實(shí)驗(yàn)可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板（Greiner）；

（4）如果細(xì)胞遷移能力較弱，下室液體可用3T3細(xì)胞無血清培養(yǎng)24小時(shí)獲得的

上清加50 g/ml FN（Fibronectin），具體可查閱相關(guān)文獻(xiàn)；

（5）細(xì)胞懸液加入膜中央，盡量保證液面水平；

（6）固定染色擦洗時(shí)動(dòng)作小心，避免擦去膜底面的細(xì)胞。但一定要充分擦凈膜

表面上未遷移的細(xì)胞，以免影響讀數(shù)。尤其是膜周邊上可用細(xì)牙簽或小鑷

子纏上濕棉花擦洗，但要小心避免將膜戳破；

（7）Chamber和膜上都無法標(biāo)記，操作時(shí)應(yīng)小心避免混淆實(shí)驗(yàn)組和對照組；

（8）充分晾干，避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致。

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（cell invasion assay）

實(shí)驗(yàn)材料

（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存

（2）其余材料同遷移實(shí)驗(yàn)

關(guān)注本網(wǎng)官方微信 隨時(shí)閱讀專業(yè)資訊