技術文章 酵母雙雜交文庫構建技術服務 閱讀：344 發(fā)布時間：2019/2/20

酵母雙雜交文庫構建技術服務介紹
酵母雙雜交技術產生以來，主要應用在以下幾個方向：
1、檢驗一對功能已知蛋白間的相互作用。
2、 研究一對蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結構域。
3、 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫，以研究蛋白質之間相互作用的傳遞途徑。
4、分析新基因的生物學功能，即以功能未知的新基因去篩選文庫。通常依靠報告基因的轉錄激活來鑒定蛋白相互作用。將一個基因克隆到"誘餌"載體，并和GAL4蛋白的DNA結合域(DBD)表達為融合蛋白。將第二個基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到"獵物"載體，同GAL4的轉錄激活域(AD)表達為融合蛋白。當兩個蛋白相互作用時，AD和DBD間距離被拉近，從而激活報告基因的表達。
本服務項目使用infusion重組系統(tǒng)進行重組，使用zhuan利的cDNA合成方法進行cDNA的合成。
實驗步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不經過PCR擴增過程，比SMART方法質量大大提高）
1.4.cDNA長度分級
1.5.分級后的cDNA與酵母雙雜載體(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等載體，或者客戶指定載體)進行infusion重組。
1.6.重組后產物電轉化感受態(tài)細胞
1.7.文庫鋪板檢測與菌液保存
1.8.文庫質粒提取
產品內容
我們提供構建好的酵母文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），文庫甘油菌，隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構建報告，酵母雙雜交篩選相關細胞和質粒。
質量標準
3.1文庫庫容量：大于1*10^7CFU。
3.2平均插入片段：大于1.2Kbp。
3.3陽性率：大于95%。
服務時間
20個工作日內
備注1：該酵母文庫可以選擇增加均一化處理步驟，我們使用DSN法均一化方法，可以構建出高質量的均一化酵母雜交文庫，可以大大減少后續(xù)酵母篩選的工作量和篩選效率等。
提供的產品
詳細的實驗報告
酵母雙雜交（酵母單雜交）文庫質粒、菌液
備注2：如果客戶需要轉化酵母，我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液（同clontech）。
服務周期
獲得合格的總RNA后25工作日，如需轉化酵母延長15個工作日。
材料要求
客戶構建指定的酵母雙雜交cDNA文庫，由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可：細胞樣本：細胞數量大于1*10^7
動物樣本：大于1g
物樣本：大于2g
總RNA：大于200u
服務流程 
1、提交項目課題相關需求和資料。 
2、與我們的專業(yè)技術團隊討論項目細節(jié)。 
3、根據討論后的意見對實驗方案進行修改。 
4、雙方均滿意并達成一致，簽訂技術服務合同。 
5、開展實驗，按期完成合同規(guī)定的內容。 
6、結題，提供實驗原始結果和分析結果、實驗流程、實驗條件等等。 
咨詢與訂購 
感謝您選擇我們的服務，如果您有任何問題，請聯系我們，我們將竭誠為您解答和服務。

 

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