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細(xì)胞名稱HUVEC-C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞|HUVEC-C細(xì)胞

生長特性 貼壁生長

形態(tài)特性 上皮樣

產(chǎn)品規(guī)格 1 10^6 cells/瓶

培養(yǎng)條件 MEM+10%FBS+1%P/S

生長條件 氣相：5%CO2  95% 空氣   溫度：37 ℃

凍存條件 90%FBS+10%DMSO

背景資料 最初認(rèn)為這個細(xì)胞源自喉上皮癌，但隨后通過同功酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，起源細(xì)胞已被HeLa污染。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。

HUVEC-C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞|HUVEC-C細(xì)胞常規(guī)說明：

凍存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液

細(xì)胞質(zhì)檢情況：不含細(xì)菌、真菌、支原體等微生物污染

傳代建議：1:2~1:3傳代，2~3天換液1次

特別提醒：簽收細(xì)胞后，如細(xì)胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請務(wù)必重視。

一、 細(xì)胞復(fù)蘇

1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

5. 3天換一次培養(yǎng)基。

HUVEC-C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養(yǎng)瓶（4個以上）的細(xì)胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養(yǎng)瓶一個培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化過度啊！一個一個的做會不會又太費時呢？

培養(yǎng)基 D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：33.5攝氏度。
生長特性 貼壁生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細(xì)胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細(xì)胞系之間的污染，應(yīng)該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，

HUVEC-C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞也能把握好各種貼壁細(xì)胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強(qiáng)烈建議一個一個處理細(xì)胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細(xì)胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細(xì)胞容易出現(xiàn)細(xì)胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細(xì)菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，HUVEC-C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞消化的時間與細(xì)胞的來源有很大關(guān)系，貼壁性強(qiáng)的細(xì)胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強(qiáng)的癌細(xì)胞外，細(xì)胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細(xì)胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細(xì)胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關(guān)鍵原因還是細(xì)胞復(fù)蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，最后一次成功是因為注意到這個問題。細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果HUVEC-C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細(xì)胞內(nèi)部會產(chǎn)生很多冰晶對細(xì)胞就有致命的損失了。另外，細(xì)胞的確應(yīng)該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細(xì)胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態(tài)會很差。ZYC3821   神經(jīng)前體細(xì)胞培養(yǎng)基   NPrCM   形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣   培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3822    神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基   NM   形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣   培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3823    少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)基   OPCM   形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣   培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3824    球狀少突細(xì)胞培養(yǎng)基   OsM   形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣   培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3825    角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基   KM   形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣   培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3826    角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基（確定）    KM-d   形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣   培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方法

問題

原因

解決方案

細(xì)胞生長緩慢

生長培養(yǎng)基使用不當(dāng)

按照生產(chǎn)商的建議，使用相應(yīng)的預(yù)熱生長培養(yǎng)基。

生長培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差

使用其他批次血清。

傳代操作不當(dāng)

按照生產(chǎn)商的建議消化時間及傳代比例進(jìn)行操作。

換液過于頻繁

降低換液頻率，參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。

細(xì)胞傳代次數(shù)過多

使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。

細(xì)胞生長超過匯合狀態(tài)

哺乳動物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時進(jìn)行，建議細(xì)胞密度達(dá) 80-90%傳代。

細(xì)胞被支原體污染

將細(xì)胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細(xì)胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。

細(xì)胞復(fù)蘇存活率低

細(xì)胞凍存不當(dāng)

新取一只凍存細(xì)胞，并儲存在液氮中。將細(xì)胞儲存在液氮中，直至復(fù)蘇。

自行制備的凍存細(xì)胞無活性

將細(xì)胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。

制備凍存細(xì)胞時使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞。

嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細(xì)胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。

新取一只凍存細(xì)胞。

細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng)

嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。

確保冷凍細(xì)胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。

復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)

使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。

細(xì)胞稀釋過度

按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細(xì)胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。

處理細(xì)胞時動作不夠輕柔

凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細(xì)胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時除外)，也不要高速離心細(xì)胞。

凍存液中所用保護(hù)劑在儲存過程中未避光

如果未避光儲存，凍存保護(hù)劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷?xì)胞有毒性的物質(zhì)；新取一只凍存保護(hù)劑，重新凍存細(xì)胞。

 ★由于細(xì)胞庫現(xiàn)有細(xì)胞類目多，為了不出現(xiàn)混亂錯誤，需要了解相關(guān)細(xì)胞價格及詳細(xì)資料直接call，對您造成的不便還請見諒！
 ★注：如運輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補(bǔ)發(fā)
       收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)
最后，通過低溫保藏儲備一些細(xì)胞，以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象，或常規(guī)檢測呈陽性結(jié)果，那么最可靠的補(bǔ)救措施是扔掉所有培養(yǎng)物，清潔培養(yǎng)箱和超凈臺，一切從頭開始。當(dāng)然，你得確保儲備的細(xì)胞是不含支原體的。