CCK-8，您細(xì)胞活力檢測(cè)的專家

靈敏、簡(jiǎn)便、低毒

產(chǎn)品背景

細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于細(xì)胞增殖、毒性和活力的檢測(cè)是至關(guān)重要的。目前常用的細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑通常是通過(guò)基于線粒體內(nèi)的脫氫還原酶的還原能力來(lái)進(jìn)行檢測(cè)的，如MTT法，XTT法，WST-1法，CCK 法等。

翊圣生物推出一款基于WST-8的細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒 Cell Counting Kit簡(jiǎn)稱CCK試劑盒，相較于MTT等其細(xì)胞毒性更低，檢測(cè)更靈敏，操作更簡(jiǎn)便。

實(shí)驗(yàn)原理

WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）在電子耦合載體1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（formazan），顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

表1 CCK法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較

檢測(cè)方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK 法

甲臜產(chǎn)物的水溶性

差（需加有機(jī)溶劑溶解檢測(cè)）

好

好

好

產(chǎn)品性狀

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

現(xiàn)配現(xiàn)用

即開(kāi)即用

即開(kāi)即用

檢測(cè)靈敏度

高

很高

很高

高

檢測(cè)時(shí)間

較長(zhǎng)

較短

較短

zui短

檢測(cè)波長(zhǎng)

560-600 nm

420-480 nm

420-480 nm

430-490 nm

細(xì)胞毒性

高，細(xì)胞形態(tài)完全消失

很低，細(xì)胞形態(tài)不變

很低，細(xì)胞形態(tài)不變

很低，細(xì)胞形態(tài)不變

試劑穩(wěn)定性

一般

較差

一般

很好

批量樣品檢測(cè)

可以

非常適合

非常適合

非常適合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

操作簡(jiǎn)單：產(chǎn)品本身是液體，即開(kāi)即用；甲臜產(chǎn)物是水溶性的，不需要用有機(jī)溶劑溶解。

靈敏度高：線性范圍廣，靈敏度高，重復(fù)性好。

細(xì)胞毒性低：細(xì)胞毒性非常低，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有影響。

穩(wěn)定性好：培養(yǎng)液中酚紅和血清的存在不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

應(yīng)用性廣：可用于大規(guī)模、高通量樣品檢測(cè)。

細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗(yàn)、生物因子的活性檢測(cè)等

同類產(chǎn)品性能比較：

細(xì)胞類型：293T人胚腎細(xì)胞；培養(yǎng)基：10% FBS 高糖DMEM培養(yǎng)基

孵育時(shí)間：3h；細(xì)胞數(shù)目：1000

GIST-T1細(xì)胞增殖檢測(cè)

CRTL為空白對(duì)照組，Lv-shNC為陰性干擾組，Lv-shOrai1為Orai1敲除組

ROS17/2.8細(xì)胞增殖檢測(cè)

WT為野生型，KO為BK基因敲除組

rMSCs細(xì)胞活性檢測(cè)

在2.5,5,10,20ug/mL的濃度 G/SWCNT hybrids, G, and SWCNTs處理下的細(xì)胞活性檢測(cè)

rMSCs細(xì)胞增殖檢測(cè)

G/SWCNT hybrids 在2.5,5,10,20ug/mL的濃度下處理1,3和7天細(xì)胞活性檢測(cè)

Huh6細(xì)胞干擾EZH2基因和陰性對(duì)照組細(xì)胞活性檢測(cè)

HepG2細(xì)胞干擾EZH2基因和陰性對(duì)照組細(xì)胞活性檢測(cè)

GIST-T1 細(xì)胞活性檢測(cè)

分別在2-APB 不同濃度0, 50, 100, and 150 M處理下的細(xì)胞活力檢測(cè)

GIST-T1 細(xì)胞活性檢測(cè)

分別在SKF-96365不同濃度下

0, 0.5, 1.0, and 1.5 M處理下胞活力檢測(cè)

Q1：CCK的保存和穩(wěn)定性如何？

答：CCK穩(wěn)定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經(jīng)常使用建議4℃保存，避免反復(fù)凍融。CCK正常顏色為粉紅色，若顏色發(fā)生明顯偏差，質(zhì)量可能有發(fā)生變化。

Q2：CCK的細(xì)胞毒性如何？

答：CCK毒性非常低，因此CCK檢測(cè)完后相同的細(xì)胞還能用于其它細(xì)胞增殖檢測(cè)如結(jié)晶紫染色法，中性紅染色法或DNA熒光染色法。

Q3：CCK會(huì)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色嗎？

答：不會(huì)，首先WST-8不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞染色，整個(gè)顯色反應(yīng)都是在培養(yǎng)體系中進(jìn)行的。另外WST和WST-8甲臜都屬于高度水溶性組分，反應(yīng)結(jié)束更換新的培養(yǎng)液，即可清除外源組分。

Q4：做細(xì)胞活性檢測(cè)時(shí)，每孔應(yīng)該接種多少個(gè)細(xì)胞？

答：當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的zui小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100 L培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100 L培養(yǎng)基)。

Q5：若是使用6孔或者24孔板進(jìn)行試驗(yàn)，CCK試劑使用量怎么樣呢？

答：如果要使用6孔板或24孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。

Q6：培養(yǎng)基的本底顏色如酚紅會(huì)不會(huì)影響細(xì)胞活性的檢測(cè)呢？

答：不會(huì)的，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

Q7：能否用384孔板進(jìn)行細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/p>

答：可以，CCK-8產(chǎn)品的使用量為每孔培養(yǎng)基總體積的10%。建議先將CCK-8產(chǎn)品稀釋一倍，然后加入培養(yǎng)基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。

Q8：只可以在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值嗎？

答：可以在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，但是若無(wú)此波長(zhǎng)的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測(cè)靈敏度zui高。

Q9：若是暫不檢測(cè)OD值，該如何處理？

答：若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10 L 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化

Q10：在加入CCK-8時(shí)可否不更換培養(yǎng)基？

答：一般情況下可以不更換培養(yǎng)基。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質(zhì)的話，有可能會(huì)產(chǎn)生誤差，必須更換其它培養(yǎng)基。

Q11：在實(shí)驗(yàn)中OD值太高，怎么解決？

答：可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。例如：可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間由2小時(shí)縮短為1小時(shí)。此外，可適當(dāng)減少細(xì)胞的數(shù)量。

Q12：如果OD值太低，怎么解決？

答：可以采取2個(gè)辦法：1、適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量  2、延長(zhǎng)加入CCK-8試劑后的反應(yīng)時(shí)間。

Q13：應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎？

答：建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的，但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞，建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格（元）

促銷價(jià)（元）

Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒

40203ES60

100T (1 mL)

150.00

150.00

Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒

40203ES76

500T (5 mL)

480.00

480.00

Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒

40203ES80

1000T (10 mL)

920.00

897.00

Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒

40203ES88

3000T (30 mL)

1833.00

1687.00

Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒

40203ES92

10000T (100 mL)

5122.00

4897.00

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