一、臺盼藍(lán)染色法
此方法原理是死細(xì)胞被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色,而活細(xì)胞不著色,故亦稱拒藍(lán)染色法,此法簡便,快速,但不能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞代謝活性差異。
(一)材料
1.單細(xì)胞懸液。
2.O.4%臺盼藍(lán)溶液O.4g臺盼藍(lán)溶于100ml PBS或生理鹽水中,經(jīng)濾膜過濾,4℃保存?zhèn)溆谩?br>
3.血細(xì)胞計(jì)數(shù)器、顯微鏡等。
(二)方法
取O.2珊細(xì)胞懸液等量加0.4%臺盼藍(lán)溶液,充分混勻,然后滴加少許于載玻片上,覆以蓋玻片,低倍鏡下計(jì)數(shù)至少200個(gè)細(xì)胞,死細(xì)胞被染成藍(lán)色,活細(xì)胞不著色呈無色透明狀。
(三)結(jié)果
細(xì)胞的存活率計(jì)算公式如下:
細(xì)胞存活率=未藍(lán)染細(xì)胞數(shù)/(藍(lán)染細(xì)胞數(shù)+未藍(lán)染細(xì)胞數(shù)) 100%
(四)注意事項(xiàng)
1.用24 7L或孔數(shù)少于24的培養(yǎng)板,避免細(xì)胞數(shù)太少不能制備細(xì)胞懸液。
2.細(xì)胞懸液要充分混勻,充分分離細(xì)胞。
二、中性紅法
中性紅是常用的活體染色染料,可被活細(xì)胞攝取并使溶酶體著色??芍苯佑糜诨铙w細(xì)胞的染色和顯微鏡下觀察,或用于觀察細(xì)胞的病毒蝕斑,肉眼計(jì)數(shù)空斑數(shù)目。因其毒性大,染色后細(xì)胞不能再培養(yǎng)。
(一)材料
1.96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的待測細(xì)胞。
2.0.15%的中性紅溶液:用生理鹽水(或Hanks液)溶解中性紅,經(jīng)高壓蒸氣滅菌后在暗處存放。
3.細(xì)胞固定液:乙酸和乙醛的混合物,各含1%。
4.中性紅提取液:乙酸和乙醇的混合物,含乙酸1%、乙醇50%。elisa試劑盒
(二)方法
將培養(yǎng)板上培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)液棄掉,加入0.15%中性紅溶液0.1ml,培養(yǎng)3h后棄掉中性紅溶液。加入細(xì)胞固定液0.2ml固定5min,棄固定液,加人中性紅提取液0.1ml,在測定波長570nm、參考波長650nm處比色。
(三)結(jié)果分析
以每孔細(xì)胞的吸光度值反映細(xì)胞的活性,吸光度值越大,說明細(xì)胞活性越好??捎弥行约t相對攝取率(%)來反映實(shí)驗(yàn)因素對細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響,即受試組的吸光度值與對照組吸光度值的百分率。
(四)注意事項(xiàng)elisa試劑盒
在加人中性紅提取液之前,要將培養(yǎng)板孔內(nèi)殘留的中性紅溶液徹底洗干凈,以免影響zui終結(jié)果。
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