一、臺盼藍(lán)染色法

     此方法原理是死細(xì)胞被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色，而活細(xì)胞不著色，故亦稱拒藍(lán)染色法，此法簡便，快速，但不能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞代謝活性差異。

(一)材料

1．單細(xì)胞懸液。

2．O．4％臺盼藍(lán)溶液O．4g臺盼藍(lán)溶于100ml PBS或生理鹽水中，經(jīng)濾膜過濾，4℃保存?zhèn)溆谩?br>
3．血細(xì)胞計(jì)數(shù)器、顯微鏡等。

(二)方法

    取O．2珊細(xì)胞懸液等量加0．4％臺盼藍(lán)溶液，充分混勻，然后滴加少許于載玻片上，覆以蓋玻片，低倍鏡下計(jì)數(shù)至少200個(gè)細(xì)胞，死細(xì)胞被染成藍(lán)色，活細(xì)胞不著色呈無色透明狀。

(三)結(jié)果

    細(xì)胞的存活率計(jì)算公式如下：

    細(xì)胞存活率=未藍(lán)染細(xì)胞數(shù)／(藍(lán)染細(xì)胞數(shù)+未藍(lán)染細(xì)胞數(shù)) 100％

(四)注意事項(xiàng)

1．用24 7L或孔數(shù)少于24的培養(yǎng)板，避免細(xì)胞數(shù)太少不能制備細(xì)胞懸液。

2．細(xì)胞懸液要充分混勻，充分分離細(xì)胞。

二、中性紅法

    中性紅是常用的活體染色染料，可被活細(xì)胞攝取并使溶酶體著色?？芍苯佑糜诨铙w細(xì)胞的染色和顯微鏡下觀察，或用于觀察細(xì)胞的病毒蝕斑，肉眼計(jì)數(shù)空斑數(shù)目。因其毒性大，染色后細(xì)胞不能再培養(yǎng)。

(一)材料

1．96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的待測細(xì)胞。

2．0．15％的中性紅溶液：用生理鹽水(或Hanks液)溶解中性紅，經(jīng)高壓蒸氣滅菌后在暗處存放。

3．細(xì)胞固定液：乙酸和乙醛的混合物，各含1％。

4．中性紅提取液：乙酸和乙醇的混合物，含乙酸1％、乙醇50％。elisa試劑盒

(二)方法

    將培養(yǎng)板上培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)液棄掉，加入0．15％中性紅溶液0．1ml，培養(yǎng)3h后棄掉中性紅溶液。加入細(xì)胞固定液0．2ml固定5min，棄固定液，加人中性紅提取液0．1ml，在測定波長570nm、參考波長650nm處比色。

(三)結(jié)果分析

    以每孔細(xì)胞的吸光度值反映細(xì)胞的活性，吸光度值越大，說明細(xì)胞活性越好?？捎弥行约t相對攝取率(％)來反映實(shí)驗(yàn)因素對細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響，即受試組的吸光度值與對照組吸光度值的百分率。

(四)注意事項(xiàng)elisa試劑盒

    在加人中性紅提取液之前，要將培養(yǎng)板孔內(nèi)殘留的中性紅溶液徹底洗干凈，以免影響zui終結(jié)果。 

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