細胞培養(yǎng)時的具體步驟剖析 一、復(fù)蘇 1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。 2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)瓶的15ml的離心管中（用培養(yǎng)瓶把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。 3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。 4.標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。 5.三天換一次培養(yǎng)基。 二、傳代 1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。 2.把原有培養(yǎng)基吸掉。 3.加適當?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行），消化1-2分鐘。 4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。 5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。 6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。 7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)瓶，把細胞都吹起來。 8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。 三、凍存 把細胞消化下來并離心。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制：70%的完全培養(yǎng)基+20S+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

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