在熟肉制品，即食生肉制品、干酪、再制干酪以及飼料中，常需檢查單增李斯特菌的存在，因為這些地方也是。李斯特菌屬有七個菌種，其中單增李斯特菌為致病菌，和人類關系最為密切。但單增李斯特菌的檢驗較為費時，前期增菌、分離外，后期還要做鑒定。目前，李斯特菌顯色培養(yǎng)基已得到普遍應用，并發(fā)現(xiàn)優(yōu)于PALCAM平板，因為后者無法區(qū)分是單增李斯特菌與英諾克李斯特菌，但前者可以。但目前市面上大多數(shù)的李斯特菌顯色培養(yǎng)基也存在不足，它在分離鑒別出單增李斯特菌的同時，無法區(qū)分出單增李斯特菌與伊氏李斯特菌，也就是說，二者菌落形態(tài)均完全相同。

實際在檢測單增李斯特菌的過程中，曾有新疆疾控中心的人員發(fā)現(xiàn)，單增李斯特氏菌與伊氏李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌誤判現(xiàn)象突出2。這三種常易混淆的李斯特菌在葡萄糖、麥芽糖、MR-VP、甘露醇、七葉苷方面的生化反應均一致，溶血反應可區(qū)分英諾克與單增。木糖、鼠李糖反應可區(qū)分伊氏與單增。但溶血反應對操作技巧要求較高，同時，木糖、鼠李糖反應也包括在生化鑒定試劑條中，容易導致重復操作，比較耗時。而要進行生化試劑條的鑒定，還需挑菌落后進行純培養(yǎng)。

在這里，筆者給出一些不同的方案，可省卻后續(xù)復雜的鑒定步驟，供有關人員參考。一是在二次增菌后，直接使用一款單增李斯特菌驗證培養(yǎng)基（HiMedia生產，貨號MV1552）來分離鑒別。該培養(yǎng)基是依據(jù)磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C（PIPLC）活性和 -甲基-D-甘露糖苷的發(fā)酵。磷脂酶C是一種重要的毒力因子，只有單核細胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌具有。單增和伊氏李斯特菌水解培養(yǎng)基中的底物，菌落周圍產生不透明的光暈。單增和伊氏的鑒別是通過 -甲基-D-甘露糖苷的發(fā)酵。單增為陽性，菌落有黃色光暈。伊氏則為陰性。該培養(yǎng)基含有鼠李糖，酚紅為指示劑。其培養(yǎng)反應如下：

圖中標號分別為1. 單核細胞增生李斯特氏菌、2. 伊氏李斯特菌、3. 英諾克李斯特菌、4. 斯氏李斯特氏菌

第二個方案是采用國標推薦的李斯特菌顯色培養(yǎng)基（可使用HiMedia生產的，貨號MV1540，符合國標的標準，質量可靠，價格低于同類進口產品，可降低檢測成本），培養(yǎng)反應如下：

但該類顯色培養(yǎng)基無法區(qū)分單增與伊氏李斯特菌，進一步鑒別可直接使用李斯特菌生化鑒定試劑盒（內含12種生化反應，HiMedia生產，貨號KB0012A）。該試劑盒已包含木糖和鼠李糖的發(fā)酵反應。產品外形如下圖：

如不想用生化鑒定試劑盒，可用另一款改良型李斯特菌顯色瓊脂（貨號M1417），它可區(qū)分單增與伊氏李斯特菌，如下圖：

35-37 C 培養(yǎng)24-48小時后，單增李斯特菌（左） 藍綠色菌落，帶黃色光暈。伊氏李斯特菌（右） 藍綠色菌落，無黃色光暈。但要注意，這款顯色培養(yǎng)基無法區(qū)分單增與英諾克李斯特菌。如果使用一款顯色培養(yǎng)基同時區(qū)分單增、伊氏和英諾克，還可采用單增李斯特菌快速鑒別瓊脂（貨號M1924）。其培養(yǎng)反應如下圖所示：

其具體菌落特征如下：

有機體（ATCC）

接種（CFU）

生長

菌落顏色

鼠李糖發(fā)酵

PIPLC活性

枯草芽胞桿菌（6633）

103

抑制

白色念珠菌（10231）

103

抑制

大腸桿菌（25922）

103

抑制

英諾克李斯特菌（33090）

50-100

旺盛

藍綠色

（+）黃色背景

（-）

綿羊李斯特菌（19119）

50-100

旺盛

藍綠色

（-）

（+）菌落有不透明光環(huán)

單增李斯特菌（19118）

50-100

旺盛

藍綠色

（+）黃色背景

（+）菌落有不透明光環(huán)

綠膿桿菌（27853）

103

抑制

參考文獻

1. 蘇靜  于烽  劉艷  遠雪梅  馬鑫. 單增李斯特氏菌國家標準檢驗方法的驗證與探討. 疾病預防控制通報. 2015-06-24

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