防止蛋白降解
整體規(guī)矩:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白質(zhì)的過程中,早些按捺,常常按捺分裝蛋白溶液,貯存于不同的溫度和不同的緩沖液中,測蛋白活性,找出zui適貯存條件冷藏,并加入穩(wěn)定劑。這些穩(wěn)定劑一般都能充沛堅持蛋白的生物學活性。將蛋白溶液儲于50%(V/V)的甘油或懸于硫酸銨(3.2M)中,防止凍存冰結(jié)晶會形成物理剪切及蛋白變性。防止酶的重復凍融,如果酶需求凍存,分裝成小管后凍存。
蛋白質(zhì)的貯存
蛋白樣品在液氮中速凍,拿出后加入10-20%的甘油,長時間貯存,整個試驗過程中,都要將蛋白樣品置于冰上。
從母管中吸取不同的蛋白時,都要用新鮮的槍頭不要將未用的溶液倒回母管,戴手套操作,防止蛋白交叉污染,或是蛋白酶的污染,防止劇烈的震動,防止溶液中混入蛋白變性劑,試驗的過程中應(yīng)防止塵埃進入,塵埃包括60%的肌氨酸。
操作過程
操作時總是小體積小量的操作,防止污染,而且動作要快
下面為常見的蛋白酶類型及相對應(yīng)的按捺劑:
a:此類蛋白酶在活性中心包括絲氨酸和組氨酸。
b:此類蛋白酶在活性中心包括半胱氨酸(巰基,-SH-)。
c:此類蛋白酶在活性中心包括金屬離子(如:Zn2+,Ca2+,Mn2+)。
d:此類蛋白酶在活性中心包括天冬氨酸族。
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