目前，在活細胞的DNA染色中，有兩組染料。第一組是Hoechst系列，它們具有細胞滲透性和熒光性（即低熒光直到結(jié)合靶DNA），但由于340-360nm范圍內(nèi)短紫外-藍色波長激發(fā)的要求，它們具有相當?shù)亩拘浴?/p>

第二組活細胞染料由遠紅外染料組成，如SiR-DNA 、Syto61 、Draq5 或Vybrant Dyecycle Ruby。這些染料克服了前一組光譜范圍的限制，允許使用波長約為650nm、發(fā)射波長約為700nm的低能激發(fā)光。這種光具有最小的光毒性（SiR-Tubulin 和SiR-Actin ）并且細胞或組織樣品在該光譜范圍內(nèi)不吸收光也不自發(fā)熒光，這使得在厚樣本中有更深處成像成為可能。 

SiR-DNA （SiR Hoechst）是基于熒光團硅羅丹明（SiR）和DNA小槽粘合劑雙苯甲酰亞胺（Hoechst）組合而成，它比遠紅外染料組其他染料更具優(yōu)勢。

SiR Hoechst（SiR-DNA ） 和其他遠紅外DNA染料長時間活細胞成像對比圖，顯示SiR Hoechst的低毒性及熒光穩(wěn)定性

市面上幾種常見DNA染料對比 

特性
 

SiR-DNA
 

其他遠紅外染料
Syto61 、Draq5 或Vybrant Dyecycle
 

短波長染料

Hoechst

DAPI、EB

 細胞毒性

8小時內(nèi)持續(xù)使用對細胞無影響

廠家建議使用的濃度下對細胞顯示出強烈的毒性作用（細胞停止分裂或死亡）

適用于活細胞，但細胞毒性高，

不適于活細胞，且EB致使細胞突變

細胞滲透性

有細胞滲透性

有細胞滲透性

有細胞滲透性

無細胞滲透性

特異性

針對于活細胞DNA，特異性非常好

Syto61 、Draq5 或Vybrant Dyecycle 染料在活細胞的DNA以外的其他結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生強烈的非特異性信號

很高的吸收率和自發(fā)熒光，背景較高

超分辨率顯微鏡兼容性

在多次暴露于激發(fā)光下信號仍然很強

Syto61與超分辨顯微鏡兼容，但其高背景熒光和細胞毒性

不適合超分辨率分析

注：SiR-DNA 是Spirochrome SA公司的商標 (瑞士)

Vybrant DyeCycle Ruby stain 和Syto61 是美國Thermo Fisher Scientific公司的商標

DRAQ5 是Biostatus公司商標

Hoechst 是美國Sanofi公司商標

SiR-DNA 的主要發(fā)展方向是將熒光特性、高DNA特異性、低毒性與遠紅外激發(fā)/發(fā)射范圍相結(jié)合。此外，由于其穩(wěn)定性和對遠紅光的特性，探針在超分辨顯微鏡（STDE和SIM）中表現(xiàn)非常好。因此，SiR-DNA 是一種優(yōu)良的探針，其性能與SiR-tubulin和SiR-actin一樣優(yōu)秀。

在顯微鏡觀察和高通量篩選過程中，SiR-DNA 可以在不受紫外線刺激的情況下進行簡單的核復染。在流式細胞術過程中，SiR-DNA 可以直接用于血液/BM的表型分析和細胞DNA含量分析，而無需紅細胞溶解或固定、滲透或RNase處理等步驟。 

說了這么多，您有沒有對SiR-DNA 活細胞染料很心動了？作為專業(yè)的生命科學解決方案供應商，艾美捷科技為您推薦全球暢銷的活細胞DNA染色試劑盒： 

產(chǎn)品名稱

Ex/Em

濾光鏡

貨號

SiR-DNA Kit

652/672nm

標準Cy5設置

 CY-SC007

* 試劑盒均內(nèi)含Verapamil（維拉帕米，戊脈安），一種廣譜的外排泵抑制劑。

廠家質(zhì)檢：

常見問題整理：

是否兼容固定細胞？

SiR-DNA 可以與甲醇或PFA固定的細胞一起使用。然而，介質(zhì)對SiR-DNA 的亮度有很大的影響。當混有PBS或Vectashield 的細胞產(chǎn)生很低的信號，混合有純甘油的細胞會染出非常明亮的細胞核。因此，我們建議在用SiR-DNA 染色固定細胞時使用純甘油作為介質(zhì)。

哪些物種的樣本和組織能被SiR探針染色？

下方僅引述已報告起作用的細胞系、組織或生物體。

智人：U2OS，成纖維細胞，HeLa，HUVEC, MCF-10A, HCT-116, A549,紅細胞

肌肉：C2C12，IA32，骨骼肌，原代心肌細胞，原代卵母細胞

褐家鼠：初級海馬神經(jīng)元、初級皮質(zhì)神經(jīng)元、NRK

風信子：COS-7

金鯽：BHK

黑腹果蠅：Notum上皮，S2

迪德爾菲斯有袋動物：OK細胞

為什么SiR探針的背景比其他熒光團低？

SiR探針使用的是近紅外/遠紅外光譜范圍內(nèi)的激發(fā)光，從而避免較短波長的光產(chǎn)生自發(fā)熒光，從而避免產(chǎn)生較高的背景。SiR耦合探針具有兩種物理狀態(tài)：①非熒光，關閉狀態(tài)（spirolactone）和②高熒光，開啟狀態(tài)（zwitterion）。探針與其配體目標的結(jié)合有利于高熒光的開放狀態(tài)，而未結(jié)合探針則存在于封閉、非熒光狀態(tài)（下圖）。從未結(jié)合態(tài)到結(jié)合態(tài)熒光放大率增加100倍。這就產(chǎn)生了一種高度敏感的生物傳感器，其中大部分熒光只發(fā)生在結(jié)合態(tài)。

SiR衍生物在熒光（開放）型（左結(jié)構(gòu)）和非熒光（封閉）型（右結(jié)構(gòu)）之間存在平衡

Nature Communication專屬產(chǎn)品文章精彩了解：

G. Lukinavicius et al.,SiR Hoechst is a far-red DNA stain for live-cell nanoscopy, Nat. Commun. 6:8497 doi: 10.1038/ncomms9497 (2015).

不同類型細胞DNA成像圖，4 m SiR Hoechst

SiR-Hoechst染色HeLa細胞的共聚焦（confocal）和電鏡（STED）對比

Cytoskeleton公司成立于1993年，專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產(chǎn)品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。

目前主要的產(chǎn)品有340余種，其產(chǎn)品主要覆蓋肌動蛋白，微管蛋白，馬達蛋白，小G蛋白，細胞外基質(zhì)，活細胞成像等相關領域，提供對應的蛋白質(zhì)，抗體，檢測與分析試劑盒，并且產(chǎn)品線還在不斷的擴大中。此外，公司還提供微管蛋白，肌動蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等現(xiàn)有產(chǎn)品的藥物篩選服務。

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