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流式細胞儀的工作原理_91化工儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-02  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):566
核心提示:流式細胞儀主要由四部分組成:流動室和液流系統(tǒng),激光源和光學(xué)系統(tǒng),光電管和檢測系統(tǒng),計算機和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測時將待測細胞或微粒制成細胞懸液,進行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓人流動室,在高壓下磷酸緩沖液(鞘 液)從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形流束(鞘流),待測細胞在鞘液包繞下單行排 列,依次通過檢測區(qū)。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦后的光束,垂直照射在樣品流上,當(dāng)細胞攜帶

 流式細胞儀主要由四部分組成:流動室和液流系統(tǒng),激光源和光學(xué)系統(tǒng),光電管和檢測系統(tǒng),計算機和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測時將待測細胞或微粒制成細胞懸液,進行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓人流動室,在高壓下磷酸緩沖液(鞘 液)從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形流束(鞘流),待測細胞在鞘液包繞下單行排 列,依次通過檢測區(qū)。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦后的光束,垂直照射在樣品流上,當(dāng)細胞攜帶熒光素標(biāo)記物通過激光照射區(qū)時,產(chǎn)生代表細胞內(nèi) 部不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號,這些信號以細胞為中心向空間360o 立體角發(fā)射,產(chǎn)生散射光和熒光信號。散射光包括前向角散射和側(cè)向角散射。前向角散射與被測細胞直徑的平方密切相關(guān),反映細胞體積的大小。側(cè)向角散射光對細 胞膜、胞質(zhì)及核膜的折射率更為敏感,可提供有關(guān)細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。經(jīng)熒光染色的細胞受到適合的光波激發(fā)后產(chǎn)生的熒光通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電 信號。zui常用的光電轉(zhuǎn)換器是光電倍增管。從光電倍增管輸出的電信號需要經(jīng)過放大后才能被傳送到計算機,經(jīng)模/數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)轿C處理器形成數(shù)據(jù)文件,保存 在計算機上。保存在計算機上的數(shù)據(jù)可在脫機后再進行數(shù)據(jù)處理和分析。

 

  細胞的分選是通過分離含有單細胞 的液滴而實現(xiàn)的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,充電后振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負 不同的電荷,當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的正負電荷偏轉(zhuǎn)板時,在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),落人各自的收集容器中,不予充電的液滴落人中間的廢液容器,從而實現(xiàn)細 胞的分離。

  流式細胞儀結(jié)構(gòu)圖


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關(guān)鍵詞: 細胞 散射 熒光 樣品 信號
 
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