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潮霉素B(液體) 怎么用
貨號:H8080
規(guī)格:1g
品牌:Germany
分子式 : C20H37N3O13
分子量 : 527.52
儲存條件 : 2-8℃
外觀(性狀) : 澄清或輕微渾濁黃色溶液
單位 : 瓶 【詳細說明】
潮霉素B(液體) 怎么用
貨號:H8080
規(guī)格:1g
品牌:Germany
分子式 : C20H37N3O13
分子量 : 527.52
儲存條件 : 2-8℃
外觀(性狀) : 澄清或輕微渾濁黃色溶液
單位 : 瓶
潮霉素B(HygromycinB )是由吸水鏈霉菌(Streptomyceshygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。
潮霉素B的應(yīng)用:
1)篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);
2)由于作用模式的差異,常與G418(GeneticinTM),Zeocin 和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料;哺乳動物細胞選擇的有效濃度通常是50 g/ml-1 mg/ml之間;對于植物細胞,其有效濃度是20 200 g/ml;對于細菌,有效濃度是20 200 g/ml;對于真菌,有效濃度是200 g 1 mg/ml。
化學(xué)性質(zhì):
潮霉素B是微黃褐色無定形粉末,有特殊氣味,熔點160-180℃。為弱堿,易溶于水、甲醇、乙醇,易與許多有機酸和無機酸生成鹽。
保存方法:溶液直接存放在2℃~8℃,至少存放1年。
蛋白質(zhì)合成抑制劑,可用于植物細胞培養(yǎng)等生化研究。
潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。
大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記,用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (Cat:G8161),Zeocin (Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)聯(lián)合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進入因為病毒感染增強通透性的細胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
本品是無菌的潮霉素B溶液(100mg/ml),可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。
使用方法
1. 常用篩選濃度
注意:潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000 g/mL。對于*次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定zui佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500 g/mL;細菌/植物細胞20-200 g/mL;真菌300-1000 g/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素zui低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) *天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過一夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000 g/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
終濃度( g/mL)
培養(yǎng)基體積(ml)
5mg/ml潮霉素B加入體積(ml)
50
9.9
0.1
100
9.8
0.2
250
9.5
0.5
500
9.0
1.0
750
8.5
1.5
1000
8.0
2.0
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果zui好。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,zui好將細胞稀釋至豐度不超過25%。
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項
1) 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2) 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。
3) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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潮霉素B(液體) 怎么用訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當日zui新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶專用的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送至客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶專用冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶專用的箱子(保溫效果zui少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送至客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。
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