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潮霉素B（液體） 怎么用
貨號：H8080
規(guī)格：1g
品牌：Germany
分子式 : C20H37N3O13
分子量 : 527.52
儲存條件 : 2-8℃
外觀（性狀） : 澄清或輕微渾濁黃色溶液
單位 : 瓶 【詳細說明】

潮霉素B（液體） 怎么用
貨號：H8080
規(guī)格：1g
品牌：Germany
分子式 : C20H37N3O13 
分子量 : 527.52 
儲存條件 : 2-8℃
外觀（性狀） : 澄清或輕微渾濁黃色溶液 
單位 : 瓶

商品貨號：商品品牌：規(guī)格基本售價：選擇規(guī)格H8080-1gSolarbio1g1100.00元 

    潮霉素B(HygromycinB )是由吸水鏈霉菌（Streptomyceshygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。 

 

潮霉素B的應(yīng)用：

    1）篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）；

    2）由于作用模式的差異，常與G418（GeneticinTM），Zeocin  和blasticidin S聯(lián)合使用，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株

    3）抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進入毒感染增強通透性的細胞，而且具有抑制翻譯的功效；

    4）作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料；哺乳動物細胞選擇的有效濃度通常是50 g/ml-1 mg/ml之間；對于植物細胞，其有效濃度是20 200 g/ml；對于細菌，有效濃度是20 200 g/ml；對于真菌，有效濃度是200 g 1 mg/ml。

 

化學(xué)性質(zhì)：

 潮霉素B是微黃褐色無定形粉末，有特殊氣味，熔點160-180℃。為弱堿，易溶于水、甲醇、乙醇，易與許多有機酸和無機酸生成鹽。

 

保存方法：溶液直接存放在2℃～8℃，至少存放1年。

 

    蛋白質(zhì)合成抑制劑，可用于植物細胞培養(yǎng)等生化研究。

    潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。
    大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Cat：G8161)，Zeocin （Cat：Z8020）和Blasticidin S（Cat：B9300）聯(lián)合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進入因為病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
    本品是無菌的潮霉素B溶液（100mg/ml），可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。 

使用方法

1.  常用篩選濃度

    注意：潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 g/mL。對于*次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定zui佳篩選濃度。

    一般而言，哺乳動物細胞50-500 g/mL；細菌/植物細胞20-200 g/mL；真菌300-1000 g/mL。

2. 殺滅曲線的建立

    注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素zui低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

    1）  *天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過一夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

    2）  根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000 g/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

終濃度（ g/mL）

培養(yǎng)基體積（ml）

5mg/ml潮霉素B加入體積（ml）

50

9.9

0.1

100

9.8

0.2

250

9.5

0.5

500

9.0

1.0

750

8.5

1.5

1000

8.0

2.0

     3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

     4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

     5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

 

3.  穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

     1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

    注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果zui好。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，zui好將細胞稀釋至豐度不超過25%。

    2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

    3）  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

    4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

    5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

 

注意事項

   1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

   2） 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。

   3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

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潮霉素B（液體） 怎么用訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當日zui新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

 

運輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶專用的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送至客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶專用冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶專用的箱子（保溫效果zui少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送至客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。 

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