導(dǎo)語

我們常說，科學(xué)家也是藝術(shù)家，在明確真理探索科學(xué)的道路上，往往會(huì)創(chuàng)造出很多美感的藝術(shù)作品。所以今天小編為大家介紹的就是能做出美美圖的新技能。

先欣賞一下美美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖~

---Olson, B. D. and Downes, G. B.

 ---in situ Hybridization of wild type Drosophila embryos

接下來為大家介紹能做出這種美美圖的新技能，原位雜交實(shí)驗(yàn)~

基本原理

簡單點(diǎn)說就是堿基互補(bǔ)配對原則。來講的話，就是我們將外源核酸（也就是常說的分子探針）與組織、細(xì)胞上待檢測的DNA或RNA進(jìn)行配對，形成核酸雜交分子，再經(jīng)過一定手段將這個(gè)雜交分子的位置顯示出來。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)的更新是很快的，在明確了該技術(shù)的可行性后，科學(xué)家進(jìn)一步改進(jìn)并進(jìn)行分類，主要有以下幾類：

熒光原位雜交技術(shù)：DNA分子原位雜交技術(shù)；在原技術(shù)手段上增加了熒光元素，技術(shù)手段較為先進(jìn)，易掌握，運(yùn)用廣泛，一會(huì)兒小編會(huì)著重介紹哦~畢竟，能夠在我們自己的實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用上，才是我們的zui終目標(biāo)嘛。

多彩色熒光原位雜交技術(shù)：顯而易見，是熒光原位雜交的升級(jí)版，采用多個(gè)熒光來檢測，目前的發(fā)展及運(yùn)用也是較多的。

原位PCR：將原位雜交結(jié)合PCR技術(shù)發(fā)展起來的實(shí)驗(yàn)方法。說實(shí)話，了解的比較少，我就不班門弄斧了，呵呵。

基因組：該技術(shù)在我們的領(lǐng)域可能運(yùn)用的畢竟少，主要是根據(jù)物種DNA同源性差異實(shí)現(xiàn)，在農(nóng)作物等的雜交育種上運(yùn)用較廣，我就不詳細(xì)介紹啦~

明確了以上的分類及原理后，接下來小編主要講講在我們的領(lǐng)域中運(yùn)用較廣的熒光原位雜交方法。

結(jié)合示意圖可以更好的理解哦

實(shí)驗(yàn)材料（重要的，基礎(chǔ)材料不贅述）

1.4%多聚甲醛（1x PBS配置）：固定劑

2.蛋白激酶K：使得靶核酸暴露，增加探針和靶核酸結(jié)合。

3.雜交緩沖溶液

實(shí)驗(yàn)步驟

取材：動(dòng)物組織取材（小鼠采用心臟灌流法）后在4%的多聚甲醛中固定4小時(shí)左右， 1x PBS洗5次，每次30分鐘，用25%蔗糖脫水過夜（均在4 進(jìn)行）。樣品做OTC冰凍切片，厚度16 mM，收集在載玻片上，冷凍于-20℃。

1. 原位雜交：

（1）取出玻片，在50℃預(yù)熱15 min，放入原位雜交盒中，加入新鮮配制的4%多聚甲醛，室溫固定30分鐘，DEPC-PBS洗三次。用10 g/ml的蛋白激酶K處理組織10~15 min，DEPC-PBS洗三次。

（2）4%多聚甲醛，室溫固定15 min，用水洗一遍后，加入預(yù)雜交液置于65℃烘箱內(nèi)。 4h后，回收預(yù)雜交液，加入含1-2 g/ml探針的雜交液， 65℃過夜。

（3）次日，用65℃的2 SSC洗滌5 min， 2-3次。將載片轉(zhuǎn)移至玻璃固定盒中65℃加入攪拌子攪拌15 min，加入RNaseA 0.2 g/ml, 37℃ 30 min。 65℃的1 SSC沖洗一次，再用0.2 SSC洗滌3次， 每次30 min。

（4）室溫下，用含15%的羊血清封閉載片1h。滴加生物素化鼠抗地高辛，室溫2h。 PBT洗滌3次，每次30 min。 用新鮮配制的堿性磷酸酶液洗滌3次，每次5 min。加入含有50 g/ml的NBT和BCIP的堿性磷酸酶液孵育過夜。

（5）觀察信號(hào)，如果信號(hào)足夠強(qiáng)，用多聚甲醛停止試驗(yàn)，用甘油封片，采集圖片。

來源：弗雷賽斯

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