DH5a感受態(tài)細(xì)胞|DH5a細(xì)胞說明書

DH5a感受態(tài)細(xì)胞|DH5a細(xì)胞說明書

DH5a Competent Cell

名稱

DH5a感受態(tài)細(xì)胞

貨號

suran001

規(guī)格

100ul X 20 支

產(chǎn)品詳情

DH5a感受態(tài)細(xì)胞，相比于常規(guī)方法制備的感受態(tài)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)化不需要冰浴、熱激和孵育等步驟，最快能在 30秒內(nèi)完成轉(zhuǎn)化步驟。轉(zhuǎn)化步驟多樣性，可以實現(xiàn) 30 秒，5 分鐘及傳統(tǒng)步驟的轉(zhuǎn)化，效率可達(dá) 108-109 菌落數(shù)/ug 質(zhì)粒（pUC19），是實現(xiàn) DNA 克隆，文庫構(gòu)建等實驗的理想產(chǎn)品。

l DH5a基因型

F- 80lacZ M15 (lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44 -thi-1gyrA96r elA1

l 優(yōu)勢

轉(zhuǎn)化快：最快30秒快速轉(zhuǎn)化，不需冰浴、熱激和孵育步驟

效率高：可達(dá)到108 - 199cfu/ug pUC19 DNA

穩(wěn)定性好；-70℃冰箱可保存一年時間

操作流程

l 轉(zhuǎn)化步驟

（1）30秒快速轉(zhuǎn)化

1、取 100ul 冰浴上融化的DH5a感受態(tài)細(xì)胞，加入目的 DNA（質(zhì)?；蛘哌B接產(chǎn)物），輕輕混勻，在冰浴中靜置 30 分鐘。

2、 向每個離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），輕柔地混勻。

3、吸取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養(yǎng)。

注意：30 秒快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的質(zhì)粒；其他抗性的質(zhì)粒，開始步驟一致，但加入 SOC 或 LB 培養(yǎng)基后，需在 37℃，200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘，然后再涂板。

（2）5分鐘轉(zhuǎn)化

1、取 100ul 冰浴上融化的DH5a感受態(tài)細(xì)胞，加入目的 DNA（質(zhì)?；蛘哌B接產(chǎn)物），輕輕混勻，在冰浴中靜置 2 分鐘。

2、42℃水浴中熱激 30 秒，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴中 2 分鐘，該過程不要振蕩離心管。

3、向每個離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），輕柔地混勻。

4、吸取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養(yǎng)。

注意：5 分鐘快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的質(zhì)粒；其他抗性的質(zhì)粒，開始步驟一致，但加入 SOC 或 LB 培養(yǎng)基后，需在 37℃，200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘，然后再涂板。

（3） 傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化步驟

1、取 100ul 冰浴上融化的DH5a感受態(tài)細(xì)胞，加入目的 DNA（質(zhì)?；蛘哌B接產(chǎn)物），輕輕混勻，在冰浴中靜置 30 分鐘。

2、42℃水浴中熱激 30 秒，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴中 2 分鐘，該過程不要振蕩離心管。

3、向每個離心管中加入 900ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），輕柔地混勻后置于 37℃，200rpm 搖床上孵育 1 小時，使細(xì)菌復(fù)蘇。

4、根據(jù)實驗要求，吸取不同體積或者離心濃縮后的已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加入含相應(yīng)抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養(yǎng)。

保存條件

-70℃保存 1年，干冰運輸  （僅供科研使用）

注意事項

1、 剛化凍的感受態(tài)細(xì)胞效率最高，避免反復(fù)凍融；

2、30秒或5分鐘快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的；其他抗性要加入 SOB 或者 LB 培養(yǎng)基，在 37℃，200rmp 搖床上至少孵育 30 分鐘；

3、轉(zhuǎn)化整個過程要輕柔，避免移液器吹吸。

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