DH5a感受態(tài)細(xì)胞|DH5a細(xì)胞說明書
DH5a感受態(tài)細(xì)胞|DH5a細(xì)胞說明書
DH5a Competent Cell
名稱
DH5a感受態(tài)細(xì)胞
貨號
suran001
規(guī)格
100ul X 20 支
產(chǎn)品詳情
DH5a感受態(tài)細(xì)胞,相比于常規(guī)方法制備的感受態(tài)細(xì)胞,其轉(zhuǎn)化不需要冰浴、熱激和孵育等步驟,最快能在 30秒內(nèi)完成轉(zhuǎn)化步驟。轉(zhuǎn)化步驟多樣性,可以實現(xiàn) 30 秒,5 分鐘及傳統(tǒng)步驟的轉(zhuǎn)化,效率可達(dá) 108-109 菌落數(shù)/ug 質(zhì)粒(pUC19),是實現(xiàn) DNA 克隆,文庫構(gòu)建等實驗的理想產(chǎn)品。
l DH5a基因型
F- 80lacZ M15 (lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44 -thi-1gyrA96r elA1
l 優(yōu)勢
轉(zhuǎn)化快:最快30秒快速轉(zhuǎn)化,不需冰浴、熱激和孵育步驟
效率高:可達(dá)到108 - 199cfu/ug pUC19 DNA
穩(wěn)定性好;-70℃冰箱可保存一年時間
操作流程
l 轉(zhuǎn)化步驟
(1)30秒快速轉(zhuǎn)化
1、取 100ul 冰浴上融化的DH5a感受態(tài)細(xì)胞,加入目的 DNA(質(zhì)?;蛘哌B接產(chǎn)物),輕輕混勻,在冰浴中靜置 30 分鐘。
2、 向每個離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),輕柔地混勻。
3、吸取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上,將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于 37℃至液體被稀釋,平板倒置,過夜培養(yǎng)。
注意:30 秒快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的質(zhì)粒;其他抗性的質(zhì)粒,開始步驟一致,但加入 SOC 或 LB 培養(yǎng)基后,需在 37℃,200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘,然后再涂板。
(2)5分鐘轉(zhuǎn)化
1、取 100ul 冰浴上融化的DH5a感受態(tài)細(xì)胞,加入目的 DNA(質(zhì)?;蛘哌B接產(chǎn)物),輕輕混勻,在冰浴中靜置 2 分鐘。
2、42℃水浴中熱激 30 秒,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴中 2 分鐘,該過程不要振蕩離心管。
3、向每個離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),輕柔地混勻。
4、吸取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上,將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于 37℃至液體被稀釋,平板倒置,過夜培養(yǎng)。
注意:5 分鐘快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的質(zhì)粒;其他抗性的質(zhì)粒,開始步驟一致,但加入 SOC 或 LB 培養(yǎng)基后,需在 37℃,200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘,然后再涂板。
(3) 傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化步驟
1、取 100ul 冰浴上融化的DH5a感受態(tài)細(xì)胞,加入目的 DNA(質(zhì)?;蛘哌B接產(chǎn)物),輕輕混勻,在冰浴中靜置 30 分鐘。
2、42℃水浴中熱激 30 秒,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴中 2 分鐘,該過程不要振蕩離心管。
3、向每個離心管中加入 900ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),輕柔地混勻后置于 37℃,200rpm 搖床上孵育 1 小時,使細(xì)菌復(fù)蘇。
4、根據(jù)實驗要求,吸取不同體積或者離心濃縮后的已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加入含相應(yīng)抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上,將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于 37℃至液體被稀釋,平板倒置,過夜培養(yǎng)。
保存條件
-70℃保存 1年,干冰運輸 (僅供科研使用)
注意事項
1、 剛化凍的感受態(tài)細(xì)胞效率最高,避免反復(fù)凍融;
2、30秒或5分鐘快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的;其他抗性要加入 SOB 或者 LB 培養(yǎng)基,在 37℃,200rmp 搖床上至少孵育 30 分鐘;
3、轉(zhuǎn)化整個過程要輕柔,避免移液器吹吸。
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