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熒光探針法PCR試劑盒采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR ）技術檢測禽組織、分泌物和排泄物中所有亞型的AIV，適用于AIV的檢測、診斷和流行病學調(diào)查。

產(chǎn)品介紹

熒光探針法PCR試劑盒說明書

【試劑盒簡介】

禽流感病毒RT-PCR 檢測試劑盒，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR ）技術檢測禽組織、分泌物和排泄物中所有亞型的AIV，適用于AIV的檢測、診斷和流行病學調(diào)查。

【原理】

利用吸附柱提取RNA作為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以引物為起點合成與RNA 模板互補的cDNA鏈；然后在DNA 聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán)，使特異DNA 片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴增的DNA 片段進行電泳、染色后，在紫外燈下，肉眼可見DNA 片段的擴增帶。 

大腸菌O157檢測試劑盒（玻片乳膠凝集反應法）大腸埃希氏菌血清志賀氏菌診斷血清無菌脫纖維馬血無菌脫纖維兔血

【試劑盒組份】

1. 生理鹽水

20mL

8. 吸附柱和收集管

10套

2. 裂解液

6mL

9. 0.2 mL 薄壁PCR 管

15個

3. 洗滌液A

7mL

10. RT-PCR 反應液A

180 L

4. 洗滌液B

7mL

11. RT-PCR 反應液B

50 L

5. 洗脫液

500 L

12. 50 倍TAE 電泳緩沖液

20mL

6. 陰性對照

300 L

13. 染色液

10 L

7. 陽性對照

300 L

 

 

注：塑料袋內(nèi)試劑（陽性對照、RT-PCR反應液A和B）-20 ℃凍存，裂解液2-8℃冷藏，其他室溫保存。

【熒光探針法PCR試劑盒操作方法】

一、樣品制備

1樣品采集：：病死或撲殺的禽，取肺、脾、腦等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物，放于50%甘油生理鹽水中或用注射器取血5 mL，2～8 ℃保存。（要求送檢病料新鮮，嚴禁反復凍融。）

2.1 組織樣品的處理：稱取組織0.1g于研磨器中磨碎，再加1mL生理鹽水繼續(xù)磨至無塊狀物；然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5 mL滅菌離心管中，8000 rpm離心2 min，取100 L上清于1.5 mL 滅菌離心管中。2樣品處理：

2.2 全血樣品的處理：待血凝后取100 L血清于1.5 mL 滅菌離心管中。

2.3 陽性對照的處理：取陽性對照 100 L于1.5 mL 滅菌離心管中。

2.4 陰性對照的處理：取陰性對照100 L于1.5 mL 滅菌離心管中。

二、病毒RNA的提取

1. 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入450 L裂解液，充分顛倒混勻，室溫靜置3min 。

2. 加入275 L無水乙醇，輕輕混勻。

3. 將混合液吸入吸附柱中（吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質(zhì)，以免離心時堵塞吸附柱），10,000 rpm 離心1min，棄去收集管中液體，套回收集管。

4. 向吸附柱中加入500 L洗滌液A，10,000 rpm 離心1min，棄去收集管中液體，套回收集管。

5. 向吸附柱中加入500 L洗滌液B，10,000 rpm 離心1min，棄去收集管中液體，套回收集管。

6. 空柱10,000 rpm 離心2 min。

7. 將吸附柱移入新的無RNA酶的1.5 mL離心管中，在膜中央加入30 L洗脫液，室溫靜置2min，10,000 rpm 離心1min，獲得總RNA。

三、RT-PCR

1. 反應體系：分別取14 L RT-PCR反應液A（用前混勻）、4 L RT-PCR反應液B（用前混勻）和2 L模板RNA，混勻。

2. 反應程序：在PCR儀上運行以下程序：42 ℃ 45 min，94 ℃ 3 min ；94 ℃ 30 s 、53℃ 30 s 、72 ℃ 30 s，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。

四、電泳

1. 制膠：用50倍稀釋的TAE電泳緩沖液配制1%瓊脂糖凝膠。

2. 電泳：待膠凝固后，取5 L PCR擴增產(chǎn)物點樣于瓊脂糖凝膠孔中，以5V/cm的電壓于50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液中電泳。

3. 染色：取50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液30mL，加入10 L染色液，混勻后將膠浸泡30min，于紫外燈下觀察結果。

【結果判斷】

  陽性對照出現(xiàn)400bp擴增帶，陰性對照無帶出現(xiàn)（引物帶除外）時，實驗結果成立。被檢樣品出現(xiàn)400bp擴增帶為新城疫病毒陽性，否則為陰性。

【需用但未提供的材料】

  組織研磨器、眼科剪、眼科鑷、一次性注射器、瓊脂糖、經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC ）處理的滅菌1.5mL 離心管和吸頭（10 L、200 L、1000 L）。

【注意事項】

1．本試劑盒有效期為6個月，不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的組分不要混用。

2．所有試劑應在規(guī)定的溫度儲存，使用時拿到室溫下，使用后立即放回。

3．注意防止試劑盒組分受污染。使用前將塑料袋內(nèi)試劑瞬離15s，使液體全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液體時移液器吸頭盡量在液體表面層吸取。

4．嚴格按試劑盒說明書操作可以獲得Z好的結果。操作過程中移液、定時等全部過程必須精確。

5．RNA提取過程中，應戴口罩、勤換手套，盡量縮短操作時間。

6．所有接觸病料的物品均應合理處理，以免污染實驗室。

 

公司優(yōu)勢：
1）質(zhì)量：我司提供的的試劑均經(jīng)過出廠檢測。不對可退換
2）價格：價格實惠，量大從優(yōu)，產(chǎn)品價格隨時會變動，實時報價還請來電獲取。
4）服務：提供完整的售前、售后和售中服務。售后到底

除了禽流感病毒RT-PCR核酸檢測試劑盒??我公司還提供：

A群溶血鏈球菌T型檢測用診斷血清B群鏈球菌檢測試劑盒（玻片乳膠凝集反應）A群鏈球菌檢測試劑盒（玻片乳膠凝集反應）腸炎弧菌檢測用診斷血清沙門氏菌診斷血清
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