雙抗體夾心法的一些疑問：

1.雙抗原夾心法的原理:

    固相抗原吸附載體 + 血清（抗體）+ 酶結(jié)合物（抗原） =  抗原*抗體*抗原復(fù)合物；

    抗原*抗體*抗原復(fù)合物 + 辣根過物氧化酶 《過氧化氫催化》 = 藍(lán)色絡(luò)合物。

2.雙抗體夾心ELISA如何篩選抗體zui適的包被濃度:

    采用棋盤滴定法，選擇一個陽性標(biāo)本和一個陰性標(biāo)本，兩者的差異性zui大，且陰性標(biāo)本吸光值小于0.1-0.2，陽性標(biāo)本控制在1左右。

3.ELISA中，若在96孔板包被抗體，抗體是被吸附在孔的底部還是內(nèi)壁？

    洗滌時候不會被甩出去。因為在放水浴箱里孵育的那段時間里，血清已經(jīng)跟杯子里的化學(xué)試劑起了反應(yīng)，粘附在里面了，洗滌甩干只是洗去多余的液體而已。

4.加一抗前要不要洗板？

    一般的ELISA實驗中封閉液同時也是一抗稀釋液，這時就沒必要洗板了。但是如果一抗稀釋液同封閉液成分不同，則應(yīng)該洗板，去除封閉液的游離成分。

5.為什么雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法？

1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。 
2） 加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。 洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。 
3） 加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合 的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。 
4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標(biāo)本中抗原的量。 

     雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。

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