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資源名稱(chēng):白色葡萄球菌培養(yǎng)
種屬:Staphylococcus albus Rosenbach
安全等級(jí) 1
模式菌株 no
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5g, 膏30g ,NaCl 5g, 瓊脂15g ,蒸餾水1L,pH 7.0-7.2 。
生長(zhǎng)條件 37℃,好氧
白色葡萄球菌培養(yǎng)檢測(cè)方法:
1.將病人標(biāo)本和/或液狀對(duì)照品放至室溫(15-30℃),輕輕混勻。測(cè)試前從包裝袋中取出檢測(cè)卡平放。
2.將1根Binax樣本拭子浸入要測(cè)試的標(biāo)本中,完全浸沒(méi)拭子頭。如果拭子有滴水,將拭子靠在收集容器的邊上,排去多余的液體。
3.檢測(cè)卡內(nèi)部的右手邊有兩個(gè)孔,將拭子插入底部的孔中(拭子孔),穩(wěn)步向前推,使整個(gè)拭子頭在上部的孔中可見(jiàn),不要取出拭子。
4.垂直持放A試劑瓶,高出檢測(cè)卡上方1/2到1英寸,慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。
5.立即從檢測(cè)卡的右緣揭去粘附襯,封閉檢測(cè)卡,過(guò)15分鐘在窗口判讀結(jié)果。15分鐘后讀取的結(jié)果可能不準(zhǔn)確。然而,有些陽(yáng)性病人不到15分鐘就出現(xiàn)可見(jiàn)樣品線。
白色葡萄球菌培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1. 取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。
2. 凍存液的問(wèn)題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO)對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作 較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)zui好選擇進(jìn)口產(chǎn)品。
3. 離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。
4. 離心問(wèn)題:目前主要有兩種見(jiàn)解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除 DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來(lái)說(shuō),把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過(guò)了活細(xì)胞會(huì)受壓過(guò)大, 死亡。此外在操作過(guò)程中容易污染,所以不推薦。另一種說(shuō)法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液 體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無(wú)有異常。
5. 細(xì)胞貼壁少的問(wèn)題:教科書(shū)中說(shuō)明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15m培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。
6. 復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問(wèn)題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過(guò)多,細(xì)胞濃度過(guò)低,不利于細(xì)胞的貼壁。
7. 加培養(yǎng)基的量放入問(wèn)題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問(wèn)題是DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響 細(xì)胞生長(zhǎng),從以前的資料來(lái)看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒(méi)有什么影響,還有一個(gè)說(shuō)法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是 10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無(wú)害濃度。
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