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 上海素冉生物科技有限公司是一批由美國留學(xué)歸來的致力于服務(wù)中國生物領(lǐng)域的青年創(chuàng)辦的一家新型公司。公司自創(chuàng)辦以來，以優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、快捷的速度和完善的售后服務(wù)，贏得生物界老師的厚愛，您選擇素冉的理由： 產(chǎn)品齊全：囊括實(shí)驗(yàn)室儀器、設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室耗材、免疫生物學(xué)試劑、動物生物學(xué)試劑、植物生物學(xué)試劑、微生物學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)試劑、遺傳學(xué)生物試劑、生物化學(xué)試劑、分子生物學(xué)試劑。 品牌齊全：囊括國內(nèi)外100多個(gè)知名品牌。 方便、快捷，訂貨周期短，選擇服務(wù)質(zhì)量好的快遞，全稱跟蹤，及時(shí)到達(dá)您的手中。素冉生物努力打造生物領(lǐng)域內(nèi)的京東商城。 平價(jià)：同等質(zhì)量的產(chǎn)品，我們這里價(jià)格實(shí)惠，為您節(jié)省每一分錢。 優(yōu)質(zhì)的售后服務(wù)：實(shí)驗(yàn)過程，我們有技術(shù)全程跟蹤指導(dǎo)，若有問題，我們第一時(shí)間為您處理，保證您售后無憂。 多姿多彩的技術(shù)服務(wù)：免疫學(xué)技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RealTime PCR)技術(shù)服務(wù)、病理學(xué)檢測技術(shù)服務(wù)等。 總之，素冉生物是您值得信賴的地方：誠實(shí)正直，以客戶的切身利益為出發(fā)點(diǎn)，關(guān)注客戶，協(xié)助客戶一起成長！

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細(xì)胞名稱：中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫|T82 人的原粒細(xì)胞（已通過STR鑒定）

T82 人的原粒細(xì)胞| T82細(xì)胞

細(xì)胞介紹

T-47分離自一位54歲乳房侵入性導(dǎo)管癌的女性患者胸水。發(fā)現(xiàn)分化的上皮亞株(T-47D)有細(xì)胞質(zhì)連接和17 雌二醇及其他類固醇降血鈣素的受體。細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因。

細(xì)胞特性

1） 來源：乳腺管癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

3） 含量： 1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的完全培養(yǎng)基。

4） 如果細(xì)胞長滿（80%-90%）請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

T82 人的原粒細(xì)胞| T82細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml胰島素；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

收到細(xì)胞后如何處理

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與臻科生物技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的同學(xué)看過來。原裝ATCC細(xì)胞現(xiàn)貨來啦。 

選擇上海素冉生物細(xì)胞有3個(gè)理由：

1、細(xì)胞狀態(tài)好，形態(tài)佳，易成活，是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;

2、物流迅速，復(fù)蘇好后發(fā)貨，次日就能到;

3、使用我司推薦的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，效果更佳。

專業(yè)技術(shù)人員李工收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:

1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買，比如 ATCC 或者素冉生物。一般上面會有針對細(xì)胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。

2. 不管是買的細(xì)胞，還是別人惠贈的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天蕞好更換一次培養(yǎng)基。

3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細(xì)胞會長的慢，可以買個(gè)支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

4. 不同細(xì)胞生長周期不同。有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索。

5. 對于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過久，吹得時(shí)候要輕柔，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。記住，是每天。

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方法

問題

原因

解決方案

細(xì)胞生長緩慢

生長培養(yǎng)基使用不當(dāng)

按照生產(chǎn)商的建議，使用相應(yīng)的預(yù)熱生長培養(yǎng)基。

生長培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差

使用其他批次血清。

傳代操作不當(dāng)

按照生產(chǎn)商的建議消化時(shí)間及傳代比例進(jìn)行操作。

換液過于頻繁

降低換液頻率，參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。

細(xì)胞傳代次數(shù)過多

使用傳代次數(shù)較少的健康細(xì)胞。

細(xì)胞生長超過匯合狀態(tài)

哺乳動物細(xì)胞傳代應(yīng)在細(xì)胞處于對數(shù)期、未達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行，建議細(xì)胞密度達(dá) 80-90%傳代。

細(xì)胞被支原體污染

將細(xì)胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細(xì)胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。

細(xì)胞復(fù)蘇存活率低

細(xì)胞凍存不當(dāng)

新取一只凍存細(xì)胞，并儲存在液氮中。將細(xì)胞儲存在液氮中，直至復(fù)蘇。

自行制備的凍存細(xì)胞無活性

將細(xì)胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。

制備凍存細(xì)胞時(shí)使用傳代次數(shù)少的細(xì)胞。

嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細(xì)胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。

新取一只凍存細(xì)胞。

細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng)

嚴(yán)格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細(xì)胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復(fù)蘇細(xì)胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。

確保冷凍細(xì)胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。

復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)

使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。

細(xì)胞稀釋過度

按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細(xì)胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。

處理細(xì)胞時(shí)動作不夠輕柔

凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細(xì)胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時(shí)除外)，也不要高速離心細(xì)胞。

凍存液中所用保護(hù)劑在儲存過程中未避光

如果未避光儲存，凍存保護(hù)劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷?xì)胞有毒性的物質(zhì)；新取一只凍存保護(hù)劑，重新凍存細(xì)胞。

 ★由于細(xì)胞庫現(xiàn)有細(xì)胞類目多，為了不出現(xiàn)混亂錯(cuò)誤，需要了解相關(guān)細(xì)胞價(jià)格及詳細(xì)資料直接call，對您造成的不便還請見諒！
 ★注：如運(yùn)輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補(bǔ)發(fā)
       收貨后十個(gè)工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價(jià)重發(fā)
最后，通過低溫保藏儲備一些細(xì)胞，以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象，或常規(guī)檢測呈陽性結(jié)果，那么最可靠的補(bǔ)救措施是扔掉所有培養(yǎng)物，清潔培養(yǎng)箱和超凈臺，一切從頭開始。當(dāng)然，你得確保儲備的細(xì)胞是不含支原體的。