1976年Chien分離出熱穩(wěn)定聚合酶，1986年Erlich分離并純化了適于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的Tq熱穩(wěn)定性聚合酶，為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)成為實用技術(shù)奠定了基礎(chǔ)，現(xiàn)已用基因重組生產(chǎn)。日前可用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的聚合酶有多種：有從水生棲熱菌中提取的Taq酶、從嗜熱棲熱苗中獲得的Taq酶、從Litoralis棲熱球菌中分離的VENT酶、及從酸熱浴硫化裂片苗中分離的Sac酶，而以Taq酶用得最廣泛。Taq DNA聚合酶分子量為94kD，75℃時酶比活性為150bs/酶分子，反應(yīng)溫度過高或過低均影響其延伸率，Taq蕾有很高的耐熱穩(wěn)定性。豬elisa試劑盒實驗表明，在92.5℃、95℃、97.5℃時，其半衰期分別為40min、30min和5min。

純化的Taq酶在體外無3 -5 外切酶活性，因而無校正閱讀功能，在擴增過程可引起錯配。錯配堿基的數(shù)量受溫度、Mg2+濃度和循環(huán)次數(shù)的影響。通常，30次循環(huán)Taq酶的錯配率約為0.25％，高于Klenow酶的錯配率。Taq酶在每一次循環(huán)中產(chǎn)生的移碼突變率為1/30000，堿基替換率為1/8000。應(yīng)用低濃度的dNTP（各20 mol／L）、1.5mmol/L的Mg2+濃度、高于55℃的復(fù)性溫度，可提高Taq酶的忠實性，此時的平均錯配率僅為5x10^-6次/（核苷酸*循環(huán)）。

Taq酶具有類似于末端轉(zhuǎn)移酶的TdT的活性，可在新生成的雙鏈產(chǎn)物的3 端加上 個堿基，尤其是dATP最容易加上。因此，欲將聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物克隆到載體上，可以用兩種處理辦法：一是構(gòu)建dT-載體；二是用Klenow酶將3 端的A去掉，即在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反應(yīng)后，先在99℃加熱10min滅活Taq酶，調(diào)整Mg2+濃度至5-10mmol/L，加入1-2U Klenow片段，室溫下作用15-20min，3 端的A即被切去，

以往用Taq酶進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增，一般只能擴增小于400bp的DNA片段，經(jīng)過對酶的結(jié)構(gòu)與功能的改造，以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法學(xué)的改進，現(xiàn)已能擴增20kb以上的DNA分于。

Taq酶在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反應(yīng)中加入的量也很重要，太少當(dāng)然不好，太多一方面浪費，同時也導(dǎo)致非特異性擴增，通常每lOO l反應(yīng)液中含1-2.5U Taq酶為好。最在0.5-5U范圍內(nèi)確定佳酶濃度。另一個問題是，雖然Taq酶是熱穩(wěn)定性較好的工具酶，也應(yīng)注意在-20℃貯存。

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