PCR實(shí)驗(yàn)里最怕出現(xiàn)什么問題?當(dāng)然是辛苦做出來的結(jié)果假陽性了。
當(dāng)PCR出現(xiàn)假陽性的時(shí)候,我們常常會考慮是不是引物/Mix/槍等等污染模板,然后一一排查,勞心勞累費(fèi)時(shí)費(fèi)力,有時(shí)還是找不到原因,簡直要崩潰。
這里我覺得要延伸思考一下,這些試劑儀器到底為什么會被污染了呢?其實(shí)是核酸氣溶膠污染。
離心機(jī)離心/劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管/PCR開蓋/吸樣時(shí)及移液器的反復(fù)吸樣等等,會產(chǎn)生空氣與液體表面摩擦的,都會產(chǎn)生核酸氣溶膠,也就是實(shí)驗(yàn)室里(或移液槍內(nèi))彌漫著含有長短不一核酸片段的小水珠或小顆粒,這些小顆粒沉降(打到)到空白樣中導(dǎo)致最后擴(kuò)增出了條帶。
可想而知,這些核酸小液滴還會落到實(shí)驗(yàn)臺面/PCR儀/移液槍/槍頭槍盒子等等地方,如果我們不注意,這些核酸小液滴就會日積月累地積聚,這樣做實(shí)驗(yàn)就特別出現(xiàn)問題比如PCR假陽性。
那么我們平常做實(shí)驗(yàn)或者實(shí)驗(yàn)室管理上核酸氣溶膠(也就是核酸小液滴)產(chǎn)生了巨大的污染究竟該怎么辦呢?
大面積核酸污染清除操作方法:
(1)對污染區(qū)域使用核酸氣溶膠污染清除劑(PCR Cleaner)進(jìn)行大面積處理,包括:地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方,同時(shí)加大通風(fēng)量(內(nèi)循環(huán)無用,盡可能外循環(huán));
(2)對污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備使用核酸氣溶膠污染清除劑(PCR Cleaner)進(jìn)行反復(fù)處理;對超凈臺等含有空氣過濾系統(tǒng)的設(shè)備,請更換過濾網(wǎng);對移液器等污染設(shè)備采用核酸氣溶膠污染清除劑(PCR Cleaner)進(jìn)行清洗,高溫滅菌;
(3)待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后,使用紫外燈輻照4小時(shí)以上;
(4)可請保潔員按照上述要求(1)(2)(3)連續(xù)清理三天;
(5)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對照組(根據(jù)污染源基因片段),進(jìn)行陰陽對照實(shí)驗(yàn),根據(jù)陰性對照確認(rèn)污染情況,可采用8連排PCR管(2個(gè)陽參+6個(gè)陰參);若陽參起跳,陰參起跳,則污染需要繼續(xù)清理;若陽參起跳,陰參全部不起跳了,則說明污染等到控制,可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn);
核酸氣溶膠污染清除劑(PCR Cleaner)一盒500 mL;10平米的房間需要2盒可完成覆蓋;其他設(shè)備及器件根據(jù)情況進(jìn)行采購;
大面積核酸氣溶膠污染非常難以清除,若不立即采取清理,污染會更加牢固,長期釋放污染核酸,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室停工。