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上傳人： 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司 |大?。?1.09KB|瀏覽：1397次|下載：4次|上傳：2018-09-29
文檔簡(jiǎn)介 產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格保存價(jià)格(元)GelRed核酸染料（500μLinwater,10,000X）C1101L1122500μL室溫550GelRed是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有獨(dú)特設(shè)計(jì)的熒光染料。在游離狀態(tài)下，GelRed發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強(qiáng)。因此，GelRed的熒光信號(hào)強(qiáng)度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān)，可以根據(jù)熒光信號(hào)檢測(cè)出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。GelRed與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標(biāo)準(zhǔn)的EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在300nm紫外光附近可得到最佳激發(fā)。GelRed的最大吸收波長約為518nm，發(fā)射波長最大約為605nm。GelRed與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對(duì)分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。另外，GelRed與EB相比，誘變能力大大降低。GelRed最初由美國Biotium公司研發(fā)，艾姆斯試驗(yàn)表明，這種新型染料細(xì)胞透過性、誘變性方面表現(xiàn)優(yōu)異，得到市場(chǎng)廣泛認(rèn)可。運(yùn)輸與保存方法常溫運(yùn)輸、保存，保質(zhì)期24個(gè)月。使用方法1．膠染法（用法同EB）（1）制膠時(shí)加入GelRed核酸染料（例如：每50mL瓊脂糖溶液中加入5μLGelRed10,000×儲(chǔ)液，以此比例類推）。（2）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。注意事項(xiàng)：此方法染色染料用量相對(duì)較少，500μL染料大約可以做100塊50mL的膠。由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備，并長期保存直到使用。此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。2．泡染法（1）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。（2）用H2O將GelRed10,000×儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1MNaCl中，制成3×染色液。（例如將15μLGelRed10,000×儲(chǔ)液和5mL1MNaCl加到45mLH2O中）。（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中，緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠，室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。注意事項(xiàng)：1）用泡染法染色時(shí)，染料用量較多，單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。2）如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。3）如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請(qǐng)嘗試：降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰、改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。3．預(yù)染法（最省染料的染色方法，按25μL體積上樣，500μL原液理論做20萬個(gè)樣品）1）該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳2）工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的GelRed原液稀釋1000倍，即為10XGelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一個(gè)月以上。3）制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。4）樣品染色：向分析樣品中加入GelRed工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使GelRed與樣品中DNA充分結(jié)合。GelRed工作液加入量為總上樣量的1/10，使GelRed在上樣時(shí)的終濃度為1X.5）DNAMarker染色：將5μLDNAMarker和1μLGelRed工作液混勻，室溫放置5分鐘，使GelRed與DNA充分結(jié)合。6）上樣、電泳：按常規(guī)操作。注意事項(xiàng)：根據(jù)染料分子量小，帶電荷少的特性開發(fā)本染色方法，按照一塊膠10個(gè)樣品計(jì)算，500μL原液理論上可以完成2萬塊膠的染色。疑難解答1.在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，GelRed可以全部從雙鏈核酸上去掉。2.如果想對(duì)用GelRed染過的膠進(jìn)行Southernblots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。3.在紫外照射透視下，與雙鏈DNA接合的GelRed呈現(xiàn)紅色熒光。4.GelRed對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。5.GelRed原液在室溫保存，如放置冰箱保存會(huì)產(chǎn)生部分沉淀，使用前適當(dāng)加熱并搖勻即可正常使用。幾種核酸染料比較名稱靈敏度穩(wěn)定性適用性安全性價(jià)格GelRed高高通用大小片段電泳染色美國安全認(rèn)定無毒中GelGreen高高通用大小片段電泳染色美國安全認(rèn)定無毒中SYBRGreenI極高差100bp以上片段電泳染色花菁染料，低毒高SYBRGreenII極高差單鏈核酸分子電泳染色花菁染料，低毒高GoldViewI低高500bp以上片段電泳染色高毒性，強(qiáng)致癌低EB低高100bp以上片段電泳染色強(qiáng)致癌，強(qiáng)誘變低
標(biāo)簽： 相關(guān)產(chǎn)品
文檔簡(jiǎn)介 產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格保存價(jià)格(元)GelRed核酸染料（500μLinwater,10,000X）C1101L1122500μL室溫550GelRed是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有獨(dú)特設(shè)計(jì)的熒光染料。在游離狀態(tài)下，GelRed發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強(qiáng)。因此，GelRed的熒光信號(hào)強(qiáng)度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān)，可以根據(jù)熒光信號(hào)檢測(cè)出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。GelRed與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標(biāo)準(zhǔn)的EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在300nm紫外光附近可得到最佳激發(fā)。GelRed的最大吸收波長約為518nm，發(fā)射波長最大約為605nm。GelRed與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對(duì)分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。另外，GelRed與EB相比，誘變能力大大降低。GelRed最初由美國Biotium公司研發(fā)，艾姆斯試驗(yàn)表明，這種新型染料細(xì)胞透過性、誘變性方面表現(xiàn)優(yōu)異，得到市場(chǎng)廣泛認(rèn)可。運(yùn)輸與保存方法常溫運(yùn)輸、保存，保質(zhì)期24個(gè)月。使用方法1．膠染法（用法同EB）（1）制膠時(shí)加入GelRed核酸染料（例如：每50mL瓊脂糖溶液中加入5μLGelRed10,000×儲(chǔ)液，以此比例類推）。（2）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。注意事項(xiàng)：此方法染色染料用量相對(duì)較少，500μL染料大約可以做100塊50mL的膠。由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備，并長期保存直到使用。此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。2．泡染法（1）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。（2）用H2O將GelRed10,000×儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1MNaCl中，制成3×染色液。（例如將15μLGelRed10,000×儲(chǔ)液和5mL1MNaCl加到45mLH2O中）。（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中，緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠，室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。注意事項(xiàng)：1）用泡染法染色時(shí)，染料用量較多，單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。2）如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。3）如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請(qǐng)嘗試：降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰、改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。3．預(yù)染法（最省染料的染色方法，按25μL體積上樣，500μL原液理論做20萬個(gè)樣品）1）該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳2）工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的GelRed原液稀釋1000倍，即為10XGelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一個(gè)月以上。3）制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。4）樣品染色：向分析樣品中加入GelRed工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使GelRed與樣品中DNA充分結(jié)合。GelRed工作液加入量為總上樣量的1/10，使GelRed在上樣時(shí)的終濃度為1X.5）DNAMarker染色：將5μLDNAMarker和1μLGelRed工作液混勻，室溫放置5分鐘，使GelRed與DNA充分結(jié)合。6）上樣、電泳：按常規(guī)操作。注意事項(xiàng)：根據(jù)染料分子量小，帶電荷少的特性開發(fā)本染色方法，按照一塊膠10個(gè)樣品計(jì)算，500μL原液理論上可以完成2萬塊膠的染色。疑難解答1.在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，GelRed可以全部從雙鏈核酸上去掉。2.如果想對(duì)用GelRed染過的膠進(jìn)行Southernblots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。3.在紫外照射透視下，與雙鏈DNA接合的GelRed呈現(xiàn)紅色熒光。4.GelRed對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。5.GelRed原液在室溫保存，如放置冰箱保存會(huì)產(chǎn)生部分沉淀，使用前適當(dāng)加熱并搖勻即可正常使用。幾種核酸染料比較名稱靈敏度穩(wěn)定性適用性安全性價(jià)格GelRed高高通用大小片段電泳染色美國安全認(rèn)定無毒中GelGreen高高通用大小片段電泳染色美國安全認(rèn)定無毒中SYBRGreenI極高差100bp以上片段電泳染色花菁染料，低毒高SYBRGreenII極高差單鏈核酸分子電泳染色花菁染料，低毒高GoldViewI低高500bp以上片段電泳染色高毒性，強(qiáng)致癌低EB低高100bp以上片段電泳染色強(qiáng)致癌，強(qiáng)誘變低
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