天美（中國）科學儀器有限公司

      對于腎臟疾病的研究，除了常規(guī)的腎臟疾病的診斷外，組織病理學診斷已經(jīng)廣泛應用。被我們所熟知的是TEM（透射電鏡）在腎組織檢測中的廣泛應用，由于樣本制備的復雜性以及受組織表面圖像信息的限制，掃描電鏡(SEM)在腎活檢檢測中的應用仍未得到廣泛的探索。隨著臺式低真空掃描電子顯微鏡(LV-SEM)發(fā)展，利用其比光鏡的放大倍數(shù)和分辨率高得多的特點，研究者發(fā)現(xiàn)了一種新的觀察方法。LV-SEM可直接觀察普通的光鏡標本無需進一步制樣處理，同時可根據(jù)光鏡樣本的厚度，為在三維水平上進行組織病理學檢測提供可能。應用LV-SEM檢測方法，有望提高病理診斷的質量。

      日立臺式掃描電鏡體積小，操作方便，不受暗室要求，具有很高的實用性。Tottori大學醫(yī)學院解剖學系的Sumire Inaga博士注意到其低真空特性，用背散射電子直接觀察沒有覆蓋蓋玻片的染色組織，得到了SEM圖像。

       結合常規(guī)的PASM-HE染色方法，同時Tottori大學的Sumire Inaga博士發(fā)明了用鉑進行重金屬染色的方法—她稱之為“鉑藍”染色法—并證明了這種方法能夠有效地觀察細胞成分。鉑藍具有細胞組織特異性和有效增強背散射電子信號的特點，便于LV-SEM觀察石蠟包埋組織切片。在玻片上未染色的薄石蠟切片脫蠟后，用鉑藍溶液進行染色，結果在LV-SEM觀察中清晰地顯示了光鏡標本的細胞結構。這樣，鉑藍染色的圖像可以清晰地顯示細胞成分和其他成分，而鈍化的圖像可以清晰地顯示銀陽性的基底膜和其他成分。這些染色特征是互補的。通過連續(xù)切片PASM染色和platin-blue染色標本的石蠟包埋組織，結合兩者的LV-SEM圖像，可以對同一位置組織病變的超細結構圖像進行嚴密的檢測（圖1）。

       薄基底膜病是一種遺傳性疾病，構成基底膜的IV型膠原發(fā)生遺傳異常，導致腎小球基底膜變薄，臨床上以持續(xù)血尿為特征。將LV-SEM應用于經(jīng)遺傳檢查、免疫染色、TEM證實的薄基膜病變的標本上，觀察到整個腎小球基底膜上的小裂縫和氣孔，表明它們與血尿有很強的相關性(圖2)。

IgA腎病是一種在日本和亞洲發(fā)病率較高的腎臟疾病。它的特點是IgA沉積，IgA是一種存在于腎小球中的免疫球蛋白，通常見于血尿的臨床病例。許多國家關于其病因和相關病理、治療方法

圖1PASE染色（左）與鉑藍染色（右）SEM對比圖

圖2薄基底膜病變的腎小球SEM圖

和預后的研究文獻很多，但涉及的機制的關鍵方面仍不清楚。許多病例的透射電鏡檢查報告表明，基底膜經(jīng)常變薄，少數(shù)證實基底膜有微小破裂，紅細胞從破裂處滲漏，但它們與血尿的共同聯(lián)系仍有待闡明。因此，我們開發(fā)了一種新的腎小球基底膜研究方法，對確診的IgA腎病病例的熒光染色標本進行PASM染色，通常需要熒光證據(jù)進行診斷。這些PASM染色標本由LV-SEM檢測。由此產(chǎn)生的LV-SEM三維圖像在IgA腎病(圖3)的腎小球基底膜上清楚地顯示出小的裂隙和孔的形成(圖3)，清楚的表明在脆弱的基底膜中形成大量的小破裂是血尿的原因。

圖3IgA腎病腎小球圖

LV-SEM可有效觀察腎活檢的光鏡標本和任何其他組織的染色選擇。它的應用很可能擴展到常規(guī)透射電子顯微鏡無法進行組織檢查，在常規(guī)光鏡檢查難以診斷的腫瘤以及許多需要超顯微信息的情況下。隨著LV-SEM的廣泛應用，除了鉑藍染色和PASM銀染色外，新的染色技術也將出現(xiàn)，并將應用于細胞病理學診斷、快速分析以滿足迫切需要這將是提高病理組織診斷準確性的重要貢獻。

（來源：天美（中國）科學儀器有限公司）