發(fā)現(xiàn)柱子這個(gè)東西,對(duì)于研究或?qū)W習(xí)化學(xué)尤其是有機(jī)化學(xué)的人來(lái)說(shuō)幾乎是無(wú)人不知無(wú)人不會(huì)的基礎(chǔ)技能(有機(jī)兩大吃飯工具,柱子 點(diǎn)板),但是業(yè)外人士卻很少有知道的。
柱子是俗稱,標(biāo)準(zhǔn)名稱叫做柱色譜,Column Chromatography,CC。這個(gè)是有機(jī)實(shí)驗(yàn)室最最最最最基礎(chǔ)的分離手段,說(shuō)這是從事大有機(jī)方向的科研人員的一只手都不為過(guò)。有機(jī)實(shí)驗(yàn)的很多反應(yīng),并不會(huì)像高中教材上的無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)?zāi)菢?,要么生成一堆沉淀,要么變成氣體飛出來(lái),產(chǎn)品自然而然的就分開(kāi)了,非常干凈漂亮。有機(jī)實(shí)驗(yàn)的反應(yīng),大部分情況下是均相的,也就是說(shuō)產(chǎn)品是混成一團(tuán)溶在溶劑里面的。同時(shí)因?yàn)橛袡C(jī)反應(yīng)副產(chǎn)物很多,所以反應(yīng)結(jié)束之后我們得到的一鍋東西是個(gè)大雜燴,什么都有:沒(méi)反應(yīng)掉的底物,反應(yīng)的副產(chǎn)品,催化劑等等,還有我們要的產(chǎn)品,都是混在一起的。這就需要我們?nèi)グ堰@些打混的東西分開(kāi),而柱子就是把這些東西分開(kāi)的方法中應(yīng)用最廣泛、適應(yīng)性最強(qiáng)的一種。
關(guān)于柱子的原理,我們這里打個(gè)比方。前面是一條小巷子,里面全是美女,丫丫叉叉的擠在一起。巷子的一頭是一群男生,想要到巷子另一頭去。于是這群男生只能從美女堆里面擠過(guò)去,于是就會(huì)有幾種不同的情況:
1)史詩(shī)的大師,絲毫不受美女的影響,色即是空,很快就到對(duì)面了;
2)精良的賢者,雖然沒(méi)有慌神,但是也放慢了腳步,第二批到達(dá)對(duì)面;
3)普通的師傅,明顯有點(diǎn)慌神了,但是也跌跌撞撞,第三批到達(dá)對(duì)面;
4)粗糙的屌絲,受迷惑最嚴(yán)重,在人群里走得最慢,而且還趁機(jī)揩油,最后才到巷子另一頭。這樣,這一堆男生就被自然而然的分開(kāi)了。
——以上是柱子的原理,也就是所有的色譜(Chromatography)的原理:利用在流動(dòng)相沖洗下,不同物質(zhì)在固定相上“跑的速度的快慢”來(lái)將不同物質(zhì)分離出來(lái)(實(shí)際上是利用物質(zhì)在固定相/流動(dòng)相的分配比的不同,或者說(shuō)固定相對(duì)不同物質(zhì)的“保留能力”的不同,但是這么說(shuō)可能更難理解一些)。其中美女就可以認(rèn)為是柱子的固定相,而男生就是那些待分的產(chǎn)品。
現(xiàn)在有機(jī)實(shí)驗(yàn)室最常規(guī)的柱子是硅膠柱,以硅膠作為固定相的柱子。正向硅膠柱上極性越低的物質(zhì)爬得越快,反向硅膠柱上極性越大的物質(zhì)爬的越快,所以使用什么樣的硅膠完全看產(chǎn)品混合物的情況。大部分情況下小分子化合物的分離,用正向硅膠柱就可以解決問(wèn)題了。如果產(chǎn)品的正電荷中心特別多,可能反相柱會(huì)更輕松一些。另外還有氧化鋁柱,堿性氧化鋁柱可以用來(lái)應(yīng)對(duì)需要在高PH環(huán)境下分離的產(chǎn)物體系。中性氧化鋁柱傾向于保留一些富電子的化合物。酸性氧化鋁柱則可以分離一些強(qiáng)酸性的物質(zhì)。氧化鋁柱的吸附性比硅膠要弱,所以如果產(chǎn)品極性特別大,在硅膠上沖不下來(lái)了可以試試用氧化鋁柱子,說(shuō)不定會(huì)有奇效。至于凝膠柱,相對(duì)硅膠柱和氧化鋁柱就屬于高科技了。主要是針對(duì)高分子產(chǎn)物的分離手段,可以把高分子產(chǎn)品和小分子化合物很快的分開(kāi)。凝膠柱的原理就相當(dāng)于固定相是一個(gè)“反篩子”:尺寸比較大的分子因?yàn)闊o(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部,所以就從凝膠之間的空隙里面鉆下去了,所以跑得更快;而尺寸小的分子則會(huì)進(jìn)入凝膠上的微孔,不會(huì)太快被沖下來(lái)。這樣就可以按照分子的尺寸而將混合物分開(kāi)。
我們實(shí)驗(yàn)室做一些量特別小的反應(yīng),也就最多幾百mg,最后的也需要至少一個(gè)上午的時(shí)間才能完整的過(guò)完一根柱子;如果是更加復(fù)雜的天然提取物的分離工作,那么一根柱子過(guò)幾天都是經(jīng)常會(huì)有的事情。柱子是有機(jī)實(shí)驗(yàn)室非常關(guān)鍵的東西,很多時(shí)候只有過(guò)完柱子、得到純凈的產(chǎn)品之后才能說(shuō)明整個(gè)反應(yīng)有意義。同時(shí)過(guò)柱子又是一個(gè)十分費(fèi)時(shí)費(fèi)精力的工作:一根柱子普遍需要過(guò)數(shù)個(gè)小時(shí)甚至更長(zhǎng)時(shí)間。
雖然耗時(shí)這么長(zhǎng),也并不意味著你可以把柱子放那兒不管然后自己去干別的——柱子必須要一直盯著才行。你需要隔一段時(shí)間點(diǎn)板(TLC,薄層色譜)來(lái)看現(xiàn)在柱子里出來(lái)的東西到底是什么:有的時(shí)候前面一個(gè)組分和后面一個(gè)組分之間就差那么四五滴,你要是錯(cuò)過(guò)了,那就可能全白費(fèi)了——尤其是對(duì)那些試管不多,習(xí)慣用燒瓶或者錐形瓶接產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)室。而柱子干了,硅膠里面可能就會(huì)混進(jìn)去非常多的氣泡,這樣產(chǎn)品就很難分開(kāi)。
對(duì)于一些要求高產(chǎn)率的課題來(lái)說(shuō),干一次柱子的結(jié)果可能是產(chǎn)率直接掉十個(gè)點(diǎn)、或者減半——這樣的打擊非常致命,很多時(shí)候搞不好是要返工從頭做的。雖然可以拿高極性的溶劑把硅膠里面殘余的產(chǎn)品泡出來(lái),不過(guò)這樣損失不小。有的時(shí)候是做了好幾步反應(yīng)到最后得到那么一點(diǎn),幾百毫克產(chǎn)品,然后過(guò)柱子的時(shí)候不小心柱子干了,然后泡也沒(méi)泡出來(lái)多少,那要從頭返工的話或許就又是一周甚至一個(gè)月的時(shí)間過(guò)去了。
不過(guò)如果只是得到產(chǎn)物就行,不用過(guò)分糾結(jié)產(chǎn)率的那種反應(yīng)(比如做小分子功能材料,只需要得到那么一點(diǎn)東西,足夠檢測(cè)其性能就可以了,產(chǎn)率并不是需要考慮的首要因素),干了柱子的話,好好處理一下問(wèn)題也不大的。干柱子是個(gè)問(wèn)題主要是針對(duì)方法學(xué)和合成實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)的。
雖然過(guò)柱子是非常累和枯燥的一件事,但是又是幾乎每個(gè)大有機(jī)方向的科研人員和研究生都逃不開(kāi)的一件事——這也是沒(méi)辦法的事情。不過(guò),雖然裝柱子的時(shí)候都非常煩躁,但是最終出產(chǎn)品的時(shí)候,還是很有成就感的。我們實(shí)驗(yàn)室做的很多反應(yīng)的產(chǎn)物都有熒光,有的時(shí)候直接拿紫外燈照柱子,柱子里面的產(chǎn)品也會(huì)階段性的有熒光,這也算是苦中作樂(lè)吧--而且還有一點(diǎn)好處,就是如果在柱子里看不到熒光,那說(shuō)明反應(yīng)失敗了,柱子也不用過(guò)了,直接重開(kāi)吧。哪怕制備色譜,其應(yīng)用局限性也很大,還有成本因素,所以也無(wú)法完全取代手工柱子。