維生素D簡(jiǎn)介

維生素D 為固醇類衍生物，具抗佝僂病作用，又稱抗佝僂病維生素。維生素D 均為不同的維生素D 原經(jīng)紫外照射后的衍生物，共五種化合物，其中與人類健康密切相關(guān)的有維生素D2（麥角鈣化醇）和維生素D3（膽鈣化醇)。它存在于部分天然食物中，同時(shí)人體皮下儲(chǔ)存有從膽固醇生成的7-脫氫膽固醇，受紫外線的照射后，可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D，因此適當(dāng)?shù)娜展庠∫部梢詽M足人體對(duì)維生素D 的需要。

逗點(diǎn)生物開發(fā)出使用固相萃取法檢測(cè)食品中維生素D2、D3 含量，致力于為客戶提供關(guān)于維生素D 檢測(cè)的有效解決方案。 

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測(cè)奶粉中維生素D2、D3的殘留。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

維生素D2(CAS: 50-14-6)、維生素D3(CAS: 67-97-0)。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于奶粉、滴劑中維生素D2、D3殘留的HPLC檢測(cè)及確證。

四、參考標(biāo)準(zhǔn)

《GB5009.82-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素A、D、E的測(cè)定》。

五、實(shí)驗(yàn)材料

biocomma? Copure? Silica 2000 mg/12 mL(Cat. No. COSIL122000)。

六、實(shí)驗(yàn)方法 

1、樣品提取

1.1 奶粉固體樣品處理

準(zhǔn)確稱取2.0 g奶粉置于50 mL離心管中，加入5 mL檸檬酸水溶液（200 g/L），4 mL二甲基亞砜，5 mL甲醇，于振蕩器中振蕩10 min，再加15 mL提取液（正己烷：甲基叔丁基醚=1:1，v/v）振蕩10 min，在4000 r/min下離心5 min，取上清液；向離心管中重新加10 mL提取液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，于50 °C下氮吹至近干，加入5 mL正己烷重新溶解，備用。

1.2 滴劑液體樣品處理

取滴劑膠囊一粒，從中剪開置于50 mL離心管中，加入10 mL提取液（乙酸乙酯：正己烷=1:9，v/v）于振蕩器振蕩提取10 min，上清液轉(zhuǎn)移，向離心管中再加10 mL提取液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，備用。

2、SPE柱凈化

(1)活化：Silica柱使用前用10 mL乙酸乙酯活化，10 mL正己烷平衡。

(2)上樣和洗脫：取備用液加入固相萃取柱中，棄去流出液；取5 mL淋洗液（乙酸乙酯：正己烷=5:95）分兩次淋洗，棄去流出液；抽干小柱；取20 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，于50 °C氮吹至近干（整個(gè)上樣、洗脫過程控制流速在1 mL/min內(nèi)）。

(3)重新溶解：加1 mL甲醇重新溶解、混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，供上機(jī)測(cè)試。

3、HPLC條件

設(shè)備：Waters Alliance 2695

色譜柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)

檢測(cè)器：Waters 2996 DAD 紫外檢測(cè)器

檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm

流動(dòng)相：甲醇：水=98：2

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣體積：20 μL 

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、1.25 mg/kg各基質(zhì)中維生素D2、D3的添加回收結(jié)果

表1  1.25 mg/kg各基質(zhì)中維生素D2、D3的添加回收結(jié)果

2、添加水平為1.25 mg/kg維生素D2、D3檢測(cè)的液相色譜圖

圖1  添加水平為1.25 mg/kg維生素D2、D3檢測(cè)的液相色譜圖

結(jié)論：本方法平均回收率為89.9 %，RSD為4.3 %，滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。