AAV-TBG-Cre/GOI系統(tǒng)簡(jiǎn)介：

l AAV-TBG-Cre系統(tǒng)是整合了肝臟特異性TBG啟動(dòng)子和Cre重組酶的腺相關(guān)病毒載體。

? TBG啟動(dòng)子是一種基于人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)啟動(dòng)子和微球蛋白增強(qiáng)子的混合型啟動(dòng)子，用于肝臟特異性轉(zhuǎn)外源基因表達(dá)。

? Cre重組酶是在P1噬菌體中發(fā)現(xiàn)的一種重組酶，具有催化活性，而且與限制酶相似，能識(shí)別特異的DNA序列，即LoxP位點(diǎn)。Cre重組酶作用于同一DNA鏈上兩個(gè)同方向的LoxP位點(diǎn)時(shí)，可以有效刪除兩個(gè)LoxP位點(diǎn)之間的堿基序列，達(dá)到重組靶DNA鏈的目的。

? AAV8-TBG-Cre腺相關(guān)病毒可高效快速感染小鼠肝臟，目前被認(rèn)為是最特異的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞示蹤工具。

l 此外，本公司還提供靶基因的病毒定制服務(wù)AAV8-TBG-GOI（Gene of Interest），實(shí)現(xiàn)外源基因在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中快速特異表達(dá)。

AAV-TBG-Cre/GOI的顯著特點(diǎn)：

l 最短時(shí)間完成――僅需1-2周
l 最高效率保障――高達(dá)100%
l 最低成本實(shí)現(xiàn)――低于KI/KO

原理 數(shù)據(jù)：

ROSA26-loxP-Stop-loxP-YFP小鼠尾靜脈分別注射1×1011?對(duì)照病毒AAV8-TBG-Blank（Control）和1×1011?AAV8-TBG-Cre病毒，一周后肝臟切片免疫組化檢測(cè)YFP表達(dá)，結(jié)果顯示 90%肝細(xì)胞表達(dá)YFP。

AAV-TBG-Cre/GOI相關(guān)產(chǎn)品 服務(wù)：

AAV-TBG-Cre/GOI應(yīng)用優(yōu)勢(shì)：

l 完勝基于白蛋白啟動(dòng)子的肝細(xì)胞特異性表達(dá)調(diào)控

表1.Alb和TBG啟動(dòng)子的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)比較

Alb-Cre，由于發(fā)育中肝前體細(xì)胞中有短時(shí)轉(zhuǎn)錄活性，其中一部分細(xì)胞可分化為膽管上皮細(xì)胞，導(dǎo)致部分膽管上皮細(xì)胞非特異性表現(xiàn)。

TBG-Cre，只在成熟肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)Cre，目前被認(rèn)為是肝細(xì)胞特異性敲除的金標(biāo)準(zhǔn)。

Alb-CreERT，除了在肝前體細(xì)胞內(nèi)的短時(shí)轉(zhuǎn)錄活性外，誘導(dǎo)劑他莫昔芬有一定肝毒性，可引起肝細(xì)胞發(fā)生膽管反應(yīng)，降低肝細(xì)胞特異性。

?

l 遠(yuǎn)超慢病毒和腺病毒的超高肝臟感染效率

表2.?三種病毒的參數(shù)比較

低免疫原性

不整合至宿主基因組，不會(huì)誘發(fā)基因失活或激活癌基因

高免疫原性

不整合至宿主基因組，不會(huì)誘發(fā)基因失活或激活癌基因

低免疫原性

隨機(jī)整合，可能導(dǎo)致宿主細(xì)胞基因失活或癌基因被激活

l 力克基因打靶技術(shù)的時(shí)間成本和技術(shù)難題

表3. AAV肝臟特異性和KO/KI小鼠比較

1.?通過(guò)常規(guī)基因打靶技術(shù)獲得cKI/KO小鼠

2. AAV-TBG-Cre病毒現(xiàn)貨

3.?尾靜脈注射

4.?開(kāi)展下游實(shí)驗(yàn)研究

1.?基因載體構(gòu)建（復(fù)雜，工作量大）

2.?胚胎干細(xì)胞獲得

3.?同源重組，篩選陽(yáng)性胚胎干細(xì)胞

4.?移植陽(yáng)性胚胎干細(xì)胞至受體胚胎，得嵌合體小鼠

5.?至少經(jīng)過(guò)兩代遺傳獲得純合體小鼠

6.?與Alb-Cre或Alb-CreERT小鼠雜交，得雜合小鼠

7.?篩選鑒定，待小鼠成年，開(kāi)展下游研究

1個(gè)月獲得AAV-TBG-GOI病毒，尾靜脈注射后1-2周肝臟特異表達(dá)，即可開(kāi)始下游實(shí)驗(yàn)。

1-2周即可開(kāi)始下游實(shí)驗(yàn)

從Alb-Cre小鼠和cKI/KO小鼠雜交計(jì)算，至少需要2個(gè)月。

模型一旦構(gòu)建，基因敲入/敲除立即生效，所有細(xì)胞均一化，無(wú)法控制數(shù)量和比例。