紫外可見分光光度計(jì)是一種應(yīng)用很廣泛的分析儀器。它的應(yīng)用涉及制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、環(huán)保、地質(zhì)、機(jī)械、冶金、石油、食品、生物、材料、計(jì)量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)，以及生產(chǎn)中的質(zhì)量控制，原材料和產(chǎn)品檢驗(yàn)等各個(gè)方面。紫外-可見分光光度計(jì)可以用于定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成分析、穩(wěn)定常數(shù)的測定、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究等。

根據(jù)日常使用經(jīng)驗(yàn)，提出了紫外可見分光光度計(jì)使用中應(yīng)注意的幾個(gè)問題，測量結(jié)果準(zhǔn)確與否，不僅與樣品及儀器的使用有關(guān)，而且與儀器的保養(yǎng)與維護(hù)直接相關(guān)。嚴(yán)格執(zhí)行儀器的日保養(yǎng)、周保養(yǎng)，月保養(yǎng)，可以減少問題的發(fā)生，為計(jì)量工作提供及時(shí)、準(zhǔn)確、可靠的檢測結(jié)果。

1.接通電源，打開分光光度計(jì)開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。

2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí)，需選用較高檔。)

3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

1、幾乎所有的光譜分析儀器(如紫外可見分光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)、一些儀器光度檢測器)都是依據(jù)的朗伯-比耳定律。

2、很多藥品要求相對誤差在1%以內(nèi)。

3、若石英比色皿QC的配對誤差為0.1%T，則給使用者帶來的分析誤差(△A/A)為0.5%。若QC的配對誤差為0.5%，則分析誤差為3%。

4、檢驗(yàn)石英比色皿QC的配對誤差時(shí)，QC中應(yīng)裝滿蒸餾水或溶劑。

5、用超聲波清洗比色皿時(shí)，一般用20W的清洗玻璃儀器的超聲波清洗30分鐘，就能解決題目，但盡不能用大功率超聲波來清洗比色皿，會(huì)損壞比色皿，特別是對那些用黏結(jié)方法制作的比色皿。

6、分析測試時(shí)，注進(jìn)比色皿的溶液不要太滿，一般到比色皿高度的2/3即可。

7、一般的光電檢測器如硅光電池、光電管、光電倍增管有疲憊效應(yīng)，應(yīng)避免長時(shí)間照射、預(yù)熱時(shí)，打開樣品室蓋，防止光電檢測器受光疲憊。

8、A.owen在1988年指出：“吸光度丈量的正確度，取決于儀器的SBW與試樣的自然帶寬NBW的比率。SBW/NBW≤0.1時(shí),吸光度正確度可高達(dá)99.5%。NBW≥20nm時(shí)，2nm的SBW對于吸光度的正確度測試是足夠的，可滿足大約99%的日常應(yīng)用。”

9、我國藥典規(guī)定，用于藥檢的紫外可見分光光度計(jì)的SBW一定要求≤2nm。

10、光譜帶寬以nm計(jì)，狹縫寬度以mm計(jì)。

11、波長正確度在某種程度上，決定光度正確度。

12、噪聲限制紫外可見分光光度計(jì)對樣品分析濃度的下限，并直接影響儀器的信噪比。雜散光直接限制被分析測試樣品濃度的上限。

13、雜散光對參比光束和樣品光束的影響是相同的。

14、在要求較高的分析測試工作中，紫外可見分光光度計(jì)的雜散光應(yīng)優(yōu)于0.05%，這樣可保證儀器有較寬的線性動(dòng)態(tài)范圍。

15、W.slavin以為，雜散光通常在紫外區(qū)。實(shí)際測試時(shí)，應(yīng)檢測整個(gè)光譜區(qū)的兩個(gè)端點(diǎn)的雜散光。

16、紫外可見分光光度計(jì)的光度噪聲與掃描速度有很大關(guān)系。一般來講，掃描速度快的紫外可見分光光度計(jì)的噪聲也大。

17、紫外可見分光光度計(jì)的基線平直度是指每個(gè)波長上的光速噪聲。測基線平直度時(shí)，掃描速度用慢速。

18、紫外可見分光光度計(jì)的線性動(dòng)態(tài)范圍取決于儀器的雜散光與噪聲。

19、在常規(guī)分析中，對大多數(shù)試樣濃度大多取10～100ug/ml，相當(dāng)0.3～0.7Abs左右最佳。在試樣量答應(yīng)時(shí)，試樣應(yīng)選擇靠近最佳吸光度值(0.434Abs)的濃度。

20、為了得到更好的光度正確度，在分析過程中，特別要留意選擇試樣的最大吸收峰處的波長作為測試波長。

21、選擇光譜帶寬的原則是，在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，測試吸光度隨光譜帶寬的變換，以獲得最大吸光度值的光譜帶寬作為欲選擇的光譜帶寬。

22、判定被測試樣是否有光解現(xiàn)象，首先要看測試數(shù)據(jù)的變化規(guī)律，對同一個(gè)試樣多次丈量，看其吸光度值是否都是向同一個(gè)方向變化，假如是，就可能有光解現(xiàn)象。

(1)儀器應(yīng)安裝在太陽不能直接照射到的地方，室內(nèi)陽光太強(qiáng)會(huì)影響儀器的使用壽命。

(2)保證有適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)環(huán)境，恒溫20℃，相對濕度20%～80%，這是儀器正確使用和維護(hù)的前提。

(3)電源與儀器、儀器與計(jì)算機(jī)、計(jì)算機(jī)與打印機(jī)要連接完好，避免通電時(shí)對儀器造成損傷。

(4)確保樣品室內(nèi)沒有以前遺留的測量樣品。

(1)測量工作開始前，首先應(yīng)開啟計(jì)算機(jī)，待計(jì)算機(jī)完全啟動(dòng)后，打開儀器，進(jìn)入測量工作程序。儀器自動(dòng)校準(zhǔn)。預(yù)熱20min以上方可開始測量工作，否則儀器不穩(wěn)定。測量過程中零點(diǎn)有0.02nm的變動(dòng)就會(huì)影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確。

(2)儀器預(yù)熱完畢，開始測量前，檢查儀器波長656.10nm點(diǎn)，測量結(jié)果偏差應(yīng)在±0.08nm內(nèi)，若超出此范圍，需重新校正儀器。儀器完全由相應(yīng)的軟件控制(即由計(jì)算機(jī)控制)，點(diǎn)擊相應(yīng)的程序，可自動(dòng)校正。