暗視野顯微鏡也叫暗場(chǎng)顯微鏡，是利用斜射照明法阻擋透過(guò)標(biāo)本細(xì)節(jié)的直射光，以反射光和衍射光來(lái)觀察標(biāo)本。在普通顯微鏡下直射光透過(guò)標(biāo)本的時(shí)候，一部分光被吸收，另一部分光透射或折射，形成標(biāo)本細(xì)節(jié)內(nèi)部結(jié)構(gòu)的真實(shí)投影。因此，在普通顯微鏡下所看到的是物體形態(tài)和結(jié)構(gòu)。而在暗視野顯微鏡下從側(cè)面照射到物體的光束，繞射或反射造成物體外形的側(cè)影。因此暗視野顯微鏡下所看到的只是物體的輪廓或物體的運(yùn)動(dòng)。

暗視野顯微鏡的故障|維修

暗視野顯微鏡是光學(xué)顯微鏡的一種，也叫超顯微鏡。暗視野顯微鏡的聚光鏡中央有擋光片，使照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背...[查看全部]

暗視野顯微鏡又叫暗場(chǎng)顯微鏡，是一種通過(guò)觀察樣品受側(cè)向光照射時(shí)所產(chǎn)生的散射光來(lái)分辨樣品細(xì)節(jié)的特殊顯微鏡。暗視野顯微鏡和明場(chǎng)不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射擊光線。因此，視場(chǎng)成為黑暗的背景，被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。

暗視野顯微鏡的原理

1、丁達(dá)爾現(xiàn)象

光通過(guò)渾濁媒質(zhì)(煙、霧、懸浮液和乳狀液等)時(shí)，渾濁介質(zhì)所呈現(xiàn)的光的強(qiáng)烈的散射現(xiàn)象。暗視野顯微鏡是以丁達(dá)爾效應(yīng)為基礎(chǔ)，即以膠體粒子的反射和散射現(xiàn)象為基礎(chǔ)而設(shè)計(jì)的。

2、暗視野顯微鏡的工作原理

暗視野顯微鏡應(yīng)用丁達(dá)爾現(xiàn)象，使用特殊的聚光器，照明光線不能直接入射到物鏡之內(nèi)，使入射光線經(jīng)聚光器斜向照明被檢樣品，利用樣品表面的散射光和反射光進(jìn)行觀察。暗視野顯微鏡視野內(nèi)所看到的圖像不是透過(guò)樣品的直射光線形成的，而是由被檢樣品表面所散射和反射的光形成的，所以暗視野中看到的是被檢樣品的衍射光圖像，非物體本身。暗視野照明法是斜射照明法的一種。

3、暗視野顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)

暗視野顯微鏡具有對(duì)微小物體的分辨能力，對(duì)大小在0.004μm以上的微小粒子，雖然看不清楚樣品的細(xì)微結(jié)構(gòu)，亦可清晰地分辨其存在和運(yùn)動(dòng)。

4、暗視野顯微鏡的缺點(diǎn)

由于暗視野顯微鏡是利用被檢樣品表面散射的光層而觀察物體的，所以，在黑暗的視場(chǎng)中只能看到被檢樣品的存在與運(yùn)動(dòng)，但不能辯清樣品內(nèi)部的細(xì)微結(jié)構(gòu)。

暗視野顯微鏡的結(jié)構(gòu)

暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區(qū)別在于二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個(gè)中央遮暗的聚光器，使光線不能通過(guò)聚光器，而只能從聚光器四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。因光線是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，故觀察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，因光散射作用而使菌體發(fā)出亮光，反射到物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中可見(jiàn)到暗視野中明亮的物像。暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力。

暗視野顯微鏡的特點(diǎn)

暗視野顯微鏡常用來(lái)觀察

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暗視野顯微鏡的采用的暗場(chǎng)聚光鏡。不讓光束由下至上的通過(guò)被檢物體，而是將光線改變途徑，使其斜射投向被檢物體，使照明光線不直接進(jìn)入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光而形成的明亮的圖象。因此，在暗視野顯微鏡鏡檢時(shí)。只能觀察到物體的存在，運(yùn)動(dòng)及外部形態(tài)，而很難分辨其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

暗視野顯微鏡的使用方法

暗視野顯微鏡鏡檢，可使用研究用暗視野顯微鏡，或?qū)⑵胀ü鈱W(xué)顯微鏡上的聚光器取下，換上暗場(chǎng)聚光器。

暗視野顯微鏡的操作方法：

1、不論是使用干燥物鏡還是油浸物鏡，暗視野顯微鏡鏡檢時(shí)，都應(yīng)在聚光器的上透鏡上加一大滴香柏油。

2、將制作好的細(xì)菌懸滴標(biāo)本片置于載物臺(tái)上，上升聚光器至頂部使油與載玻片接觸。

3、放大光源。

4、進(jìn)行聚光器光軸調(diào)節(jié)及調(diào)焦。用10×物鏡找到被檢物像，關(guān)小聚光器虹彩光圈至可在視野中看到視場(chǎng)光闌的輪廓，再上下緩慢調(diào)整聚光器，這樣會(huì)使視場(chǎng)光闌的像變得清晰，如視場(chǎng)光闌不在場(chǎng)中央，利用聚光器外側(cè)的兩個(gè)調(diào)節(jié)鈕進(jìn)行調(diào)整，當(dāng)亮光點(diǎn)調(diào)到場(chǎng)中央后，再將其開(kāi)大，即可進(jìn)行觀察。

暗視場(chǎng)聚光器的使用：

1、暗視場(chǎng)聚光器安裝：從聚光器座架上卸下明視場(chǎng)聚光器，然后將暗視場(chǎng)聚光器安裝到位并固緊。

2、將被檢樣品的玻片標(biāo)本置于載物臺(tái)上，需用油浸的暗視場(chǎng)聚光器，要在聚光器上透鏡與載玻片之間滴加香柏油，使之密接。

3、聚光器合軸調(diào)中：用低倍物鏡對(duì)樣品聚焦，隨之用聚光器升降螺旋上下調(diào)節(jié)聚光器位置，當(dāng)在暗視場(chǎng)中清晰地窺見(jiàn)一光環(huán)或圓形光點(diǎn)時(shí)，停止升降聚光器，用聚光器調(diào)中螺桿移動(dòng)聚光器，使光環(huán)或光點(diǎn)調(diào)至視場(chǎng)中心位置。

4、調(diào)節(jié)聚光器焦點(diǎn)：轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器升降螺旋，使視場(chǎng)中的光環(huán)調(diào)成一最小的圓形光點(diǎn)。此刻聚光器的焦點(diǎn)恰好位于樣品處。

5、更換需用的高倍物鏡進(jìn)行暗視野顯微鏡鏡檢觀察。

暗視場(chǎng)光擋的制作方法：

1、轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器升降螺旋，使聚光器達(dá)到最高位置。

2、用低倍物鏡對(duì)樣品聚焦。

3、暗視

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暗視野顯微鏡是光學(xué)顯微鏡的一種，也叫超顯微鏡。暗視野顯微鏡的聚光鏡中央有擋光片，使照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。

1、有足夠的照明，標(biāo)本不可見(jiàn)

暗視野顯微鏡燈電壓可以被設(shè)置得太低，或燈泡可能沒(méi)有足夠的強(qiáng)度照射試樣。將電壓升高到大約12伏或更換光源。如果不解決這個(gè)問(wèn)題，檢查暗視野顯微鏡的聚光器，以確保它正確的位置用適當(dāng)大小的視場(chǎng)光闌。此外，還要檢查顏色和中性密度濾光片，偏光板，相位差板，或其他可能會(huì)降低光照強(qiáng)度的光路。

2、視場(chǎng)的中心降低光照強(qiáng)度，有一個(gè)暗點(diǎn)

可能是暗視野顯微鏡臺(tái)下聚光器位置不正確或暗視野顯微鏡的物鏡是錯(cuò)誤的大小。將暗視野顯微鏡物鏡向上和向下，同時(shí)在視場(chǎng)中觀察試樣。檢查做出一定的物鏡孔徑和視場(chǎng)光闌設(shè)置敞開(kāi)位置。如果這并不影響照明，改變視場(chǎng)光闌尺寸使其稍大或稍小，然后重新檢查照明。

偶爾出現(xiàn)此問(wèn)題可能是，使用過(guò)厚(大于標(biāo)準(zhǔn)一毫米)載玻片。如果載玻片太厚，要么改變到正確厚度的載玻片或檢查物鏡，以確定它是否可以調(diào)整，以補(bǔ)償不同厚度的載玻片。

3、燈泡內(nèi)部有涂層的黑色蒸發(fā)的鎢燒結(jié)

在過(guò)高的電壓長(zhǎng)時(shí)間工作，這肯定會(huì)影響其壽命的燈泡已使用。更換暗視野顯微鏡燈泡，在燈電壓降低后觀察試樣的顯微攝影。

4、圖像具有明視野周邊帶

這由于暗視野顯微鏡臺(tái)下聚光器錯(cuò)誤地居中或視場(chǎng)光闌太小了?；謴?fù)到明視場(chǎng)，并重新建立科勒照明條件，再重復(fù)暗場(chǎng)的過(guò)程，確保聚光器的中心。如果這沒(méi)有作用，則增加視場(chǎng)光闌的大小，直到適當(dāng)?shù)陌祱?chǎng)條件成立。

當(dāng)暗視野顯微鏡的暗場(chǎng)聚光鏡具有太高的數(shù)值孔徑，也可能出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題。如果是在目標(biāo)內(nèi)部的可變光闌，降低光圈孔徑的大小，以確定是否太多的斜光進(jìn)入物鏡鏡頭前面。此外，它可能有助于增加視場(chǎng)光闌的大小。

5、外圍視場(chǎng)只有一側(cè)是光明的

檢查物鏡轉(zhuǎn)換器，以確保物鏡正確地定位在暗視野

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