熒光顯微鏡是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。

熒光顯微鏡的使用方法

1、用窗簾遮蔽光線，關(guān)閉房間內(nèi)的電燈，除去熒光顯微鏡的防塵罩，確保熒光顯微鏡燈室通風(fēng)良好、無遮蓋。裝上汞燈燈箱，并轉(zhuǎn)動燈箱卡圈上的撥桿，將燈箱與鏡臂連接。

2、將汞燈燈箱的電源插頭插入熒光電源箱后的插座，再將熒光電源箱的插頭插入220V外接電源。

3、打開熒光顯微鏡電源開關(guān)，電壓表顯示出電源電壓，如電源電壓波動不大于額定電壓值的5%，即可按下啟動開關(guān)點(diǎn)燃汞燈，如因天氣太冷或電壓不穩(wěn)定等原因，一次啟動未點(diǎn)燃汞燈，可以多按幾次。待超高壓汞燈弧光達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)并達(dá)到最大發(fā)光效率，即可開始工作。

4、燈泡的調(diào)中：

①任選一塊標(biāo)本放在熒光顯微鏡載物臺上。

②轉(zhuǎn)動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路，轉(zhuǎn)動濾色片組轉(zhuǎn)換手輪，將紫光(V)或藍(lán)光(B)或綠光(G)激發(fā)濾色片組轉(zhuǎn)入光路，并將25熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路。

③調(diào)節(jié)粗微調(diào)手輪，將標(biāo)本像調(diào)焦清晰。

④前后推動垂直照明器右邊的聚光鏡調(diào)焦推桿，使視場光欄成像清晰，轉(zhuǎn)動視場光欄撥桿將視場光欄收小，調(diào)節(jié)視場光欄調(diào)中螺釘使視場光欄居中，然后再將視場光欄開至最大。

⑤轉(zhuǎn)動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路，前后調(diào)節(jié)燈箱上的聚光鏡撥桿，使汞燈的弧光在視場內(nèi)成像清晰。

⑥調(diào)整燈箱上的燈泡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘，使汞燈的弧光居中。

⑦調(diào)整反光鏡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘，使光源的反射像與汞燈的弧光分開。

⑧轉(zhuǎn)動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路，此時(shí)視場照明均勻。

5、熒光觀察：

①將熒光染色標(biāo)本放到熒光顯微鏡載物臺上。

②將10x平場物鏡或25x熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路，調(diào)節(jié)載物臺縱橫移動手輪，將標(biāo)本移入光路。

③轉(zhuǎn)動濾光片轉(zhuǎn)換撥輪，將熒光染色標(biāo)本所需要的激發(fā)濾光片組轉(zhuǎn)入光路。激發(fā)濾光片組編號刻在濾片組轉(zhuǎn)換撥輪上。濾光片選擇正確與否，是熒光顯微鏡能否得到正確應(yīng)用的關(guān)鍵。選用濾光片時(shí)，必須遵守斯托克斯定律：激發(fā)濾光片的透射波長熒光顯微鏡使用注意事項(xiàng)

1、嚴(yán)格按照熒光顯微鏡說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。

2、熒光顯微鏡應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。

3、防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。

4、檢查時(shí)間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱;所以，最多不得超過2～3h。

5、熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí)，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。

6、標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。

7、熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：一般分為四級，即“-”表示無或可見微弱熒光?！?”表示僅能見明確可見的熒光?！?+”表示可見有明亮的熒光?！?++”表示可見耀眼的熒光。

熒光顯微鏡標(biāo)本制作要求

1、載玻片

載玻片厚度應(yīng)在0.8～1.2mm之間，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚集。載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發(fā)熒光。有時(shí)需用石英玻璃載玻片。

2、蓋玻片

蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強(qiáng)激發(fā)光，也可用干涉蓋玻片，這是一種特制的表面鍍有若干層對不同波長的光起不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)的蓋玻片，它可以使熒光順利通過，而反射激發(fā)光，這種反射的激發(fā)光方可激發(fā)標(biāo)本。

3、標(biāo)本

組織切片或其他標(biāo)本不能太厚，如太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部，而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外，細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋，影響判斷。

4、封裱劑

封裱劑常用甘油，必須無自發(fā)熒光，無色透明，熒光的亮度在pH8.5~9.5時(shí)較亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/lpH9.0～9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封裱劑。

5、鏡油

一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須使用鏡油，最好使用特制的無熒光鏡油，也可用甘油代替，液體石蠟也可用，只是折光率較低，對圖像質(zhì)量略有影響。

2018-12-01 15:45:05 4489次 http://www.yiqi.com/daogou/detail_1734.html 熱門標(biāo)簽：
光學(xué)顯微鏡是利用光學(xué)原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細(xì)結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器。光學(xué)顯微鏡是由一個(gè)透鏡或幾個(gè)透鏡的組合構(gòu)成，是人類進(jìn)入原子時(shí)代的標(biāo)志。

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光學(xué)顯微鏡主要由光學(xué)系統(tǒng)及支撐它們的機(jī)械結(jié)構(gòu)組成，光學(xué)系統(tǒng)包括物鏡、目鏡和聚光鏡，都是由各種光學(xué)玻璃做成的復(fù)雜化了的放大鏡。光學(xué)顯微鏡主要用于放大微小物體，使其為人的肉眼所能看見。

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光學(xué)顯微鏡是一種既古老又年輕的科學(xué)工具，從誕生至今，已有三百年的歷史。光學(xué)顯微鏡的用途十分廣泛，例如在生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、天文學(xué)等科研工作中都是離不開光學(xué)顯微鏡。

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光學(xué)顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器，它廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)和生產(chǎn)的各個(gè)領(lǐng)域，是一種十分重要的觀測工具。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、畜牧、地質(zhì)、礦產(chǎn)和一些工業(yè)部門內(nèi)，光學(xué)顯微鏡有特殊的地位，發(fā)揮重要的作用。

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光學(xué)顯微鏡是利用光學(xué)原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細(xì)結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器。主要由載物臺、聚光照明系統(tǒng)、物鏡、目鏡和調(diào)焦機(jī)組成，被廣泛用于多個(gè)領(lǐng)域中。

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光學(xué)顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器，已有300多年的發(fā)展史。自從有了光學(xué)顯微鏡，人們看到了過去看不到的許多微小生物和構(gòu)成生物的基本單元——細(xì)胞，使我們對生物體的生命活動規(guī)律有了更進(jìn)一步的認(rèn)識。

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