所謂電泳,是指帶電顆粒在電場(chǎng)作用下,向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。而通過(guò)利用帶電粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)速度不同而進(jìn)行分離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。電泳現(xiàn)象是1807年,由俄國(guó)莫斯科大學(xué)的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯最先發(fā)現(xiàn)的。隨后在1936年,瑞典學(xué)者A。W。K。蒂塞利烏斯設(shè)計(jì)制造了移動(dòng)界面電泳儀 ,分離了馬血清白蛋白的3種球蛋白,電泳技術(shù)就此出現(xiàn)。
電鍍:是高分子樹脂在金屬表面的沉積。利用電解原理在某些金屬表面上鍍上一薄層其他金屬或合金的過(guò)程。
電泳:金屬表面有另外一種金屬離子沉積的過(guò)程。溶液中帶電粒子(離子)在電場(chǎng)中移動(dòng)的現(xiàn)象,利用帶電粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)速度不同而達(dá)到分離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。
電鍍是利用電解作用使金屬或其它材料制件的表面附著一層金屬膜的工藝,從而起到防止金屬氧化(如銹蝕),提高耐磨性、導(dǎo)電性、反光性、抗腐蝕性(硫酸銅等)及增進(jìn)美觀等作用。電鍍有金屬質(zhì)感。
而電泳只是高仿電鍍,性能,顏色還是有一定的差距。電泳很難做出電鍍的金屬質(zhì)感。
但是:在漆膜均勻度方面,電泳漆涂層高低電位的 膜厚均勻,而電鍍層的高低電位的鍍層就不均勻了。
電泳在漆膜覆蓋上也更有優(yōu)勢(shì),電泳涂層能完全覆蓋隱蔽處,如內(nèi)壁及凹陷處;而電鍍一般不能深入隱蔽處。
電泳只能作用于可導(dǎo)電的金屬表面;電鍍除了金屬表面,還可以電鍍?cè)诮?jīng)過(guò)特殊處理的塑膠上面。
從成本上來(lái)說(shuō)相差甚遠(yuǎn),電泳比電鍍要便宜很多。電鍍是鍍的一層金屬,而電泳涂的是一層樹脂,電泳相比電鍍更加簡(jiǎn)單、操作方便。
電泳是以水為溶劑,廢棄物少,對(duì)環(huán)境污染少。
電鍍廢水含鉻、鎘、鎳、銀等重金屬離子和氰化物等,容易產(chǎn)生污染。
在確定的條件下,帶電粒子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度作用下,單位時(shí)間內(nèi)移動(dòng)的距離(即遷移率)為常數(shù),是該帶電粒子的物化特征性常數(shù)。不同帶電粒子因所帶電荷不同,或雖所帶電荷相同但荷質(zhì)比不同,在同一電場(chǎng)中電泳,經(jīng)一定時(shí)間后,由于移動(dòng)距離不同而相互分離。分開的距離與外加電場(chǎng)的電壓與電泳時(shí)間成正比。
在外加直流電源的作用下,膠體微粒在分散介質(zhì)里向陰極或陽(yáng)極作定向移動(dòng),這種現(xiàn)象叫做電泳。利用電泳現(xiàn)象使物質(zhì)分離,這種技術(shù)也叫做電泳。膠體有電泳現(xiàn)象,證明膠體的微粒帶有電荷。各種膠體微粒的本質(zhì)不同,它們吸附的離子不同,所以帶有不同的電荷。
1、電解
(分解)在陰極反應(yīng)最初為電解反應(yīng),生成氫氣及氫氧根離子OH ,此反應(yīng)造成陰極面形成一高堿性邊界層,當(dāng)陽(yáng)離子與氫氧根作用成為不溶于水的物質(zhì),涂膜沉積,方程式為:H2O→OH+H。
2、電泳動(dòng)
泳動(dòng)、遷移)陽(yáng)離子樹脂及H+ 在電場(chǎng)作用下,向陰極移動(dòng),而陰離子向陽(yáng)極移動(dòng)過(guò)程。
3、電沉積
(析出)在被涂工件表面,陽(yáng)離子樹脂與陰極表面堿性作用,中和而析出不沉積物,沉積于被涂工件上。
4、電滲
(脫水)涂料固體與工件表面上的涂膜為半透明性的,具有多數(shù)毛細(xì)孔,水被從陰極涂膜中排滲出來(lái),在電場(chǎng)作用下,引起涂膜脫水,而涂膜則吸附于工件表面,而完成整個(gè)電泳過(guò)程。
目前所采用的電泳方法,大致可分為3類:顯微電泳,自由界面電泳和區(qū)帶電泳。
1、按支持物的物理性狀不同,區(qū)帶電泳可分為:
(1)濾紙為支持物的紙電泳;
(2)粉末電泳: 如纖維素粉,淀粉,玻璃粉電泳;
(3)凝膠電泳:如瓊脂,瓊脂糖,硅膠,淀粉膠,聚丙烯酰胺凝膠電泳;
(4)緣線電泳:如尼龍絲,人造絲電泳
2、按支持物的裝置形式不同,區(qū)帶電泳可分為:
(1)平板式電泳:支持物水平放置,是最常用的電泳方式;
(2)垂直板電泳:聚丙烯酰胺凝膠可做成垂直板式電泳。
(3)柱狀(管狀)電泳:聚丙烯酰胺凝膠可灌入適當(dāng)?shù)碾娪竟苤凶龀晒軤铍娪尽?/p>
3、按pH的連續(xù)性不同,區(qū)帶電泳可分為:
(1)連續(xù)pH電泳:如紙電泳,醋酸纖維素薄膜電泳;
(2)非連續(xù)pH電泳:如聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳;
蛋白質(zhì)的雙向電泳的第一向?yàn)榈入娋劢? 根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離; 第二向?yàn)镾DS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進(jìn)行分離。經(jīng)過(guò)電荷和分子量?jī)纱畏蛛x后, 可以得到蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)和分子量信息。蛋白質(zhì)雙向電泳是將蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量?jī)煞N特性結(jié)合起來(lái)進(jìn)行蛋白質(zhì)分離的技術(shù), 因而具有較高的分辨率和靈敏度, 已成為蛋白質(zhì)特別是復(fù)雜體系中的蛋白質(zhì)檢測(cè)和分析的一種強(qiáng)有力的生化手段。
1、葉片可溶性蛋白質(zhì)的制備:
取葉片200 mg 加少許石英砂于液氮中研成粉末懸浮于3 ml 可溶性蛋白質(zhì)抽提液中, 4 ℃放置1 h 以上, 于4 ℃ , 15000 r/ min 條件下離心15 min , 取上清液按1∶4與冷丙酮混合, - 20 ℃ 放置3 h 以上或過(guò)夜, 同樣離心取沉淀, 用80% 丙酮洗兩次, 同上離心, 真空干燥, 溶于400 μl(9 . 5 mol/ L 尿素, 5 mmol/ L K2CO3 , 1 . 25% SDS, 0 . 5% 2-巰基乙醇, 2 . 2% 兩性電解質(zhì)pH3 . 5~ 10 , 6% TritonX-100 ) 中, 經(jīng)離心取上清液上樣。
2、第一向等電聚焦電泳( IEF)
(1 ) 玻璃管的準(zhǔn)備: 取內(nèi)徑1 . 5~2 mm, 長(zhǎng)16 cm 玻璃管用乙醇/ 鹽酸為6/ 4 的溶液浸泡30 min , 再用蒸餾水沖洗, 烘干。灌膠前用封口膜封住管的一端, 并固定。
1、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可測(cè)定蛋白質(zhì)分子量。其原理是帶大量電荷的SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上克服了蛋白質(zhì)分子原有電荷的影響而得到恒定的荷/質(zhì)比。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)蛋白質(zhì)分子量已經(jīng)比較成功,此法測(cè)定時(shí)間短,分辨率高,所需樣品量極少(1~100μg),但只適用于球形或基本上呈球形的蛋白質(zhì),某些蛋白質(zhì)不易與SDS結(jié)合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此時(shí)測(cè)定結(jié)果就不準(zhǔn)確。
2、聚丙烯酰胺凝膠電泳可用做蛋白質(zhì)純度的鑒定。聚丙烯酰胺凝膠電泳同時(shí)具有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng),可以將分子大小相同而帶不同數(shù)量電荷的物質(zhì)分離開,并且還可以將帶相同數(shù)量電荷而分子大小不同的物質(zhì)分離開。其分辨率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于一般層析方法和電泳方法,可以檢出10-9~10-12g的樣品,且重復(fù)性好,沒有電滲作用。
3、瓊脂或瓊脂糖凝膠免疫電泳可用于①檢查蛋白質(zhì)制劑的純度;②分析蛋白質(zhì)混合物的組分;③研究抗血清制劑中是否具有抗某種已知抗原的抗體;④檢驗(yàn)兩種抗原是否相同
4、聚丙烯酰胺凝膠電泳可用于蛋白質(zhì)定量。電泳后的凝膠經(jīng)凝膠掃描儀掃描,從而給出定量的結(jié)果。凝膠掃描儀主要用于對(duì)樣品單向電泳后的區(qū)帶和雙向電泳后的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描。