血紅蛋白電泳用于檢測血紅蛋白是否正?；虍惓?，即用于檢查有沒有血紅蛋白病。血紅蛋白病是一組由于珠蛋白肽鏈的結(jié)構(gòu)異?；蚝铣呻逆溗俾实母淖?，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病。常見的血紅蛋白病有地中海貧血、高鐵血紅蛋白血癥、鐮狀細(xì)胞貧血、不穩(wěn)定血紅蛋白病等。疾病的診斷往往依賴于實(shí)驗(yàn)室檢查。目前血紅蛋白電泳是診斷血紅蛋白病的最有效的手段之一。

根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點(diǎn)不同，在一定的pH緩沖液中，血紅蛋白的等電點(diǎn)小于緩沖液的pH時(shí)帶負(fù)電荷，電泳時(shí)在電場中向陽極泳動(dòng)，反之，Hb帶正電荷向陰極泳動(dòng)。在一定電壓下，經(jīng)過一定時(shí)間的電泳，不同的血紅蛋白所帶電荷不同，分子量不同，其泳動(dòng)方向和速度不同，可分離出各自的區(qū)帶，同時(shí)對(duì)電泳出的各區(qū)帶進(jìn)行比色或電泳掃描，可進(jìn)行各種血紅蛋白的定量分析。一般最常用的是pH8.6醋酸纖維薄膜電泳。

1. 血紅蛋白溶液的制備

取肝素或者枸櫞酸鈉抗凝血3 ml，2000 rpm離心10分鐘后棄去血漿；用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞三次（750 rpm，離心5分鐘），再2200 rpm，離心10分鐘，棄去上清液；加入等量的蒸餾水；再加入0.5倍體積四氯化碳，用力振搖5分鐘，2200 rpm，離心10分鐘后將上層Hb液吸出備用。

2. 浸膜

將醋酸纖維薄膜剪成3 cm×8 cm的紙條，浸入pH8.6 TEB緩沖液，浸透后取出，用濾紙吸干。

3. 點(diǎn)樣

用加樣器取血紅蛋白液10 μl，然后垂直點(diǎn)樣到醋酸纖維膜上（毛面），距邊緣1.5 cm處。

4. 電泳

將硼酸鹽緩沖液作為電泳緩沖液倒入電泳槽中，將點(diǎn)樣后的醋酸纖維膜放于電泳槽架上，點(diǎn)樣在陰極端，200 V，30分鐘。

5. 洗脫

分別剪下HbA、HbA2，放入試管內(nèi)，分別加入蒸餾水15 ml和3 ml，輕輕振蕩，待血紅蛋白完全洗脫后，混勻。

6. 比色

洗脫液用蒸餾水空白調(diào)零，415 nm測定吸光度。

7. 計(jì)算

HbA2(%)=HbA2管吸光度/（HbA管吸光度×5+ HbA2管吸光度）×100%

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

pH8.6 TEB緩沖液醋酸纖維電泳參考范圍：HbA 95%，HbA2 1%-3.1%

注意事項(xiàng)

1. 電泳時(shí)間不能太長,電泳時(shí)醋纖膜不能變干,故應(yīng)觀察到HbA和HbA2清晰分開就停止電泳,電泳時(shí)間太長區(qū)帶反而擴(kuò)散模糊；

2. 點(diǎn)樣量不能太多,如血紅蛋白液太多，色帶易脫落或染色不透，可出現(xiàn)HbA相對(duì)增高的假陽性結(jié)果；

3. 避免醋酸纖維膜被蛋白質(zhì)污染；

4．電流不應(yīng)過大，否則血紅蛋白分不開帶；

5．應(yīng)同時(shí)做正常人和必要的已知異常血紅蛋白的標(biāo)本對(duì)照。

血紅蛋白電泳檢查利用各種血紅蛋白的等電點(diǎn)不同的特點(diǎn)，在一定pH緩沖液中所帶的正、負(fù)電荷不同，經(jīng)電泳后各血紅蛋白的移動(dòng)方向不同。

(1)出現(xiàn)HbA2升高

HbA2升高可見于維生素B12或葉酸缺乏所致的巨細(xì)胞貧血、部分輕型珠蛋白生成障礙性貧血。

(2) HbA2降低：

見于缺鐵性貧血。

(3) HbF升高：

可見于純合子β珠蛋白生成障礙性貧血、雜合子β珠蛋白生成障礙性貧血和正常新生兒。

(4) 其他：

① 主要成分為HbS，而無HbB，可見于鐮形細(xì)胞血紅蛋白病。

② HbS、HbF和HbA2輕度增加，而HbA極少或消失，結(jié)合調(diào)查可診斷為HbS-β-海洋性貧血，多見于地中海地區(qū)。

③ 除HbS外，含有10%-30%HbA和輕度增高的HbF及HbA2，也可考慮HbS-β-海洋性貧血。

④ HbS占20%-30%，HbA占65%-75%，并含有正常的HbF和HbA2，可診斷為HbS-α-海洋性貧血。

⑥ HbA消失，HbC占總血紅蛋白的28%-44%，可診斷為血紅蛋白病，多見于黑人，血片中可見較多的靶形細(xì)胞。

⑦ 有HbS，還出現(xiàn)HbD，血片中有靶形細(xì)胞，可診斷為血紅蛋白D病，我國北方較多見。

⑧ 電泳結(jié)果出現(xiàn)HbE，可診斷為血紅蛋白E病，主要見于東南亞、印度等，我國以廣東南部多見。