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默克超級ELISA在腫瘤免疫治療中的應用——中國生物器材網

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-08-30  來源:儀器信息網  作者:Mr liao  瀏覽次數:549
研究腫瘤發(fā)病機制,與腫瘤對抗,這場戰(zhàn)役已經打了好幾個世紀了,顯然我們已經取得一些進展,但我們仍然沒有完全攻克,特別是近幾年來,從多學科研究,到跨學科探索,從傳統(tǒng)探索腫瘤發(fā)病機制到關于腫瘤轉移的新型代表理論“HASINI EFFECT“(哈希妮效應),從諸如PD-1/PD-L1/CTLA-4等腫瘤單抗藥如火如荼的研發(fā)和上市,到CAR-T/TCR-T等新型細胞免疫療法的廣泛立項及申報到上市,從初期昂貴的新型藥物到來自社會普遍關注下的納入醫(yī)保,在克服腫瘤的路上,我們有理由相信,治愈腫瘤,未來可期。

 

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兩篇Cancel Cell文章解讀:   Cancer Cell(IF:23.916)   在人乳腺癌中成纖維細胞異質性與免疫抑制環(huán)境
 


 

研究發(fā)現:


CAF-S1細胞能夠通過B2H7,DPP4和CD73促進T淋巴細胞(CD4+FOXP3+)的增殖

 

研究結果:


CAF-S1能夠增強Tregs細胞的分化及活性,然而CAF-S4并沒有表現出這些屬性

 

STARMETHOD(超級ELISA-Milliplex 多因子 panel)
 

入組樣本篩選(患者平均年齡,診斷/組織學分級、病理腫瘤大小、病理在診斷時確定淋巴結狀態(tài)、病理轉移狀態(tài)、指示BC亞型和腫瘤大小。)該研究實驗設計使用了前瞻性隊列研究(入組樣本均為未經任何治療的BC組織和BC癌旁組織,包含Lum和TNBC兩種亞群)和回顧性隊列研究(主要通過IHC驗證了包含60例和272例的手術切除組織,該隊列分析包含了LumA,HER2和TNBC三個亞群)。

 

 

 

圖1, CAF亞群與細胞因子的聚類分析,BC細胞培養(yǎng)上清(n=36),分析發(fā)現CAF-S1亞群與以上細胞因子相關性顯著。 

 

上圖細胞因子列表為文中所選用的細胞因子聯檢試劑盒(25 L樣本同時檢測幾十種指標)

 

結論及展望:

面臨越來越多的PD-L1單抗藥的開發(fā)與上市,不容忽視的耐藥性問題可能正是由于在免疫檢查點中大多數是PD-1/PD-L1的結合形式發(fā)生和存在的,PD-L2可能產生的耐藥性問題并不明確。相對傳統(tǒng)的免疫療法,靶向CAF-S1可能是一個有希望的作為補充治療的新型免疫療法。

 

參考文獻

1,Ali, H.R., Provenzano, E., Dawson, S.J., Blows, F.M., Liu, B., Shah, M., Earl,H.M., Poole, C.J., Hiller, L., Dunn, J.A., et al. (2014). Association between CD8+ T-cell infiltration and breast cancer survival in 12,439 patients. Ann.Oncol. 25, 1536–1543.

2,Allinen, M., Beroukhim, R., Cai, L., Brennan, C., Lahti-Domenici, J., Huang, H.,Porter, D., Hu, M., Chin, L., Richardson, A., et al. (2004). Molecular characterization of the tumor microenvironment in breast cancer. Cancer Cell 6, 17–32.

3,Ariga, N., Sato, E., Ohuchi, N., Nagura, H., and Ohtani, H. (2001). Stromal expression of fibroblast activation protein/seprase, a cell membrane serine proteinase and gelatinase, is associated with longer survival in patients with invasive ductal carcinoma of breast. Int. J. Cancer 95, 67–72.

 

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超級ELISA 腫瘤免疫治療

 


 

最新研究表明: 

經CD40配體修飾的CAR-T 細胞可通過誘導內源性抗腫瘤反應來增強抗腫瘤功能。

嵌合抗原受體(CAR) T細胞是治療B細胞惡性腫瘤的有效細胞。然而,改善 CAR-T細胞治療仍然需要。在這里,我們設計了腫瘤靶向的CAR-T細胞,使其具有本構性表達探討免疫刺激分子CD40配體(CD40L)在不同小鼠白血病中的作用淋巴瘤的模型。我們觀察到CD40L+ CAR-T細胞通過抗原繞過腫瘤免疫逃逸通過CD40/ cd40l介導的細胞毒性損失和誘導持續(xù)的內源性免疫響應。過繼細胞移植后,CD40L+ CAR-T細胞表現出較好的抗T活性。

 

研究發(fā)現:


對于腫瘤細胞,相對于m1928z CAR-T細胞,m1928z-CD40L CAR-T細胞抗腫瘤效應明顯有所改善

對于CD40+淋巴細胞和DC細胞,CD40L改良型CAR-T細胞提升共刺激分子表達上調

m1928z-CD40L CAR-T細胞激活體內APCs

腫瘤組織和脾臟中,m1928z-CD40L CAR-T細胞治療顯著增強了免疫效應因子的聚集

m1928z-CD40L CAR-T細胞通過CD40/CD40L結合誘導DCs的激活和增殖

m1928z-CD40L CAR-T細胞產生更多的體內效應細胞因子和增強效應功能,相較于內源性非CAR-T細胞

 

STAR METHOD(超級ELISA-Milliplex 多因子 panel)
 

體外分泌細胞因子分析(MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine, Premixed 13 Plex kit ):

CAR-T細胞和A20腫瘤細胞共培養(yǎng),檢測細胞培養(yǎng)上清

CAR-T細胞和BMDC(IL-12P70誘導的骨髓來源樹突狀細胞)共培養(yǎng),檢測細胞培養(yǎng)上清

 

血清細胞因子分析(MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine, Premixed 13 Plex kit ):


體外B/T細胞共培養(yǎng)

脾臟原代分離的野生型B細胞和反轉錄病毒轉導的T細胞共培養(yǎng),檢測培養(yǎng)上清(Milliplex Mouse TH17 Assay, MTH17MAG-47K)


體外CAR-T細胞和BMDC共培養(yǎng)

CAR-T細胞和BMDC(GM-CSF誘導的骨髓來源樹突狀細胞)共培養(yǎng),檢測細胞培養(yǎng)上清(Milliplex Mouse TH17 Assay, MTH17MAG-47K)

圖2 通過milliplex檢測A20腫瘤細胞和經CAR-T細胞治療后的3~7天細胞因子的變化

 

 

上圖細胞因子列表為文中所選用的細胞因子聯檢試劑盒(25 L樣本同時檢測幾十種指標)

 

結論及展望:

從免疫治療的角度來看,目標是在抗腫瘤過程中盡可能地增強免疫效應。實驗結果驗證了CD40L+ CAR-T細胞通過激活免疫系統(tǒng)的先天和適應性分子,以協調持續(xù)的內源性抗腫瘤反應,從而產生更強的抗腫瘤作用。我們相信結合CAR的高細胞毒性效應,通過CD40L共刺激分子作用于T細胞提供激活DCs的策略,招募和增強腫瘤特異性T細胞和過繼性CAR-T細胞的細胞毒性。該項研究目前正在測試 CD40L+ CAR T細胞在臨床前實體瘤模型和為臨床下一代抗cd19 CAR T細胞的制備療法做準備。

 

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參考文獻

1,Avanzi, M.P., Yeku, O., Li, X., Wijewarnasuriya, D.P., van Leeuwen, D.G.,Cheung, K., Park, H., Purdon, T.J., Daniyan, A.F., Spitzer, M.H., et al. (2018).Engineered tumor-targeted T cells mediate enhanced anti-tumor efficacy both directly and through activation of the endogenous immune system. Cell Rep. 23, 2130–2141.

2,Banchereau, J., and Steinman, R.M. (1998). Dendritic cells and the control of immunity. Nature 392, 245–252.

3,Barbier, L., Tay, S.S., McGuffog, C., Triccas, J.A., McCaughan, G.W., Bowen,D.G., and Bertolino, P. (2012). Two lymph nodes draining the mouse liver are the preferential site of DC migration and T cell activation. J. Hepatol. 57,352–358.

 
 
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