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人(Human)ALB 酶免血清白蛋白ELISA試劑盒操作原理——中國生物器材網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-08-28  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):818
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人血清白蛋白(ALB)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人血清白蛋白(ALB)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣本處理及要求
1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000 g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000 g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000 g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000 g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50 L;  樣本孔中加入待測樣本50 L;空白孔不加。  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100 L,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350 L),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。  每孔加入底物A、B各50 L,37℃避光孵育15min。  每孔加入終止液50 L,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。 試劑盒性能
 檢測范圍:3.125 mg/mL  100 mg/mL。  靈敏度:最低檢測濃度小于0.1 mg/mL。  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。  重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
 
關(guān)鍵詞: 勻漿 標本 上清 血清 檢測
 
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