懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞一般為淋巴細(xì)胞或血液系統(tǒng)來源的細(xì)胞(如人胃癌細(xì)胞SNU-5,小鼠白血病細(xì)胞WEHI-3, 人白血病細(xì)胞K-562, HL-60),這種細(xì)胞體積小,它們天生就生活在懸液(血液)中。由于缺乏黏附分子的表達(dá),在培養(yǎng)基中呈現(xiàn)懸浮狀態(tài),細(xì)胞大體呈球形或橢球型。
圖為K-562細(xì)胞,來源于ATCC
關(guān)于懸浮 de 傳代
1. 懸浮細(xì)胞無需通過酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離,整個過程較為迅速,對細(xì)胞的損傷也較小。通常有兩種方法:
2. 至于何時傳代,最準(zhǔn)確的是根據(jù)細(xì)胞密度來確定。傳代最大細(xì)胞密度隨細(xì)胞系不同而有所差異,ATCC細(xì)胞庫里提供的細(xì)胞培養(yǎng)信息,里面有培養(yǎng)條件選項,會詳細(xì)說明細(xì)胞的接種密度和培養(yǎng)密度,有的還有圖片或參考產(chǎn)品使用手冊。
如何有效去除死細(xì)胞?
細(xì)胞復(fù)蘇或培養(yǎng)過程中常會出現(xiàn)死細(xì)胞和細(xì)胞碎片,可通過低速離心的方法去除死細(xì)胞或細(xì)胞碎片,死亡細(xì)胞的碎片會留在上清中,即可除去。不同細(xì)胞離心力可能不一樣,可以先試一下300 g~500 g這個離心力,如果能離下大部分細(xì)胞就行,如果一點細(xì)胞都離不下來就適當(dāng)加大離心力和時間。
BI教您做好懸浮細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇 懸浮細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇與貼壁細(xì)胞基本一致:1. 凍存
我們推薦使用BI的無血清凍存液,直接按以下步驟進(jìn)行,操作更加方便,平均活細(xì)胞回收比例超過90%:
用BI無血清凍存液將細(xì)胞重懸(不需回溫),將細(xì)胞密度調(diào)整為3~5x106 cells/ml,添加到凍存管中(一般每管1ml)。
建議將含有細(xì)胞懸液的凍存管放入程序降溫盒或是保溫杯中,置于-80 C冰箱6小時以上或是過夜(或不需要程序降溫)。
將細(xì)胞凍存管由液態(tài)氮氣相中取出,置于室溫回溫,不用水浴溶解。此時可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng)基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。
先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基,再將化凍的細(xì)胞懸液加入離心管中。以200 g~300 g,3分鐘離心收集細(xì)胞。