細胞的生命極其脆弱
消化一定程度上是對它們的一種折磨
所以做好細胞消化,
善待你的細胞們
一些細節(jié)要注意
在使用胰酶(Trypsins)細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。
胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差,做流式時的CD Marker 也可能會下降。
細胞消化心得
對大部分細胞消化來說,可以在消化到差不多快要脫落的時候,移除大部分胰酶,然后直接加新鮮的培養(yǎng)基將細胞吹打下來,省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低,所以不會對細胞產生任何影響。
對于難消化的細胞,如HCT15, LS411和KM12,用不含Ca2+,Mg2+的PBS洗滌一次后,加入稍微多一點胰酶,置37 C徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落(一晃細胞就掉下來),然后再加培養(yǎng)基終止胰酶反應、離心 (若是無血清培養(yǎng)基,需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是,細胞消化不徹底,勢必會增加吹打輔助脫落的次數,而吹打次數越多,細胞活性越差。
正確選擇細胞消化試劑
BI提供動物來源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產的重組胰蛋白酶。
動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng),不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。貼壁不牢和半貼壁細胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育,這樣易于控制,對細胞的傷害也降到最低。對于難消化的細胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶,而不是無限的延長消化時間。
EDTA有什么作用呢?許多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA聯合作用。胰酶切割ECM負責粘連和附著的蛋白,而EDTA通過螯合Ca2+,抑制Integrin的貼壁活性,所以EDTA的作用更加溫和。
重組胰酶用于無血清培養(yǎng)。重組胰酶具有與動物源性胰蛋白酶相同的酶學性質,但是不含任何動物源成分,可替代胰蛋白酶使用。
BI生產的重組胰酶Recombinant Trypsin EDTA Solution ,堪稱傳統(tǒng)胰酶的完美替代者。無雜酶,無外源性或內源性病毒污染,無PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制劑,較傳統(tǒng)的胰酶使用方便,在細胞培養(yǎng)實驗中減少了很多不必要的操作,細胞培養(yǎng)效果大大提高了。