白細(xì)胞介素33（IL33）屬于IL1細(xì)胞因子超家族的成員，在結(jié)構(gòu)上IL33在其氨基端部分具有螺旋-角-螺旋結(jié)構(gòu)，其中存在涉及染色質(zhì)結(jié)合基序和核定位信號(hào), 在羧基端部分是 -三葉結(jié)構(gòu)域，可以與孤兒受體ST2結(jié)合[1]。IL33可由多種類型細(xì)胞表達(dá)，包括成纖維細(xì)胞，肥大細(xì)胞，樹(shù)突細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，成骨細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞。

研究表明，IL33對(duì)肺和腸道的固有粘膜免疫，氣道炎癥和外周抗原特異性反應(yīng)具有重要意義。IL33通過(guò)刺激Th2型細(xì)胞以及各種免疫細(xì)胞包括嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和天然輔助細(xì)胞 (natural helper,NH) 等表達(dá)ST2并產(chǎn)生Th2細(xì)胞因子（如IL4、IL5、IL13和趨化因子等），在各種過(guò)敏性炎癥中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2]。當(dāng)IL33、ST2和IL1RAcP組成受體復(fù)合物可以作為細(xì)胞因子的 警報(bào)素 ，將信息轉(zhuǎn)移至胞內(nèi)（ST2L和IL1RAcP是IL33作用所必需的）。IL33/ST2信號(hào)通路如下圖所示, ST2和IL1RAcP組成的受體復(fù)合物在細(xì)胞損傷或機(jī)械損傷期間釋放到細(xì)胞外，接收細(xì)胞外IL33信號(hào)導(dǎo)致Myd88、IRAK1/4和TRAF6募集，進(jìn)一步促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子NF-kB、JNK1/2和ERK1/2活化，引起炎癥反應(yīng)。

研究表明胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素 (TSLP) 主要對(duì)過(guò)敏原特異性IgE的產(chǎn)生/Th2分化有重要影響，與之不同的是IL33在哮喘發(fā)病機(jī)制對(duì)蛋白酶介導(dǎo)的與細(xì)胞損傷相關(guān)的先天性氣道炎癥至關(guān)重要[3]。

綜上，越來(lái)越多的研究證實(shí)IL33在哮喘的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，在全基因組相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，IL33及其受體基因是哮喘最敏感的基因，它可能是啟動(dòng)和維持哮喘氣道炎癥的重要細(xì)胞因子，阻斷IL33與ST2的結(jié)合可能為哮喘治療提供新的途徑。百奧賽圖成功構(gòu)建了人源化IL33哮喘模型小鼠，可為相關(guān)研究提供有力工具。

品系信息

IL33基因的RT-PCR分析

在純合子B-hIL33小鼠的脾細(xì)胞中可檢測(cè)到hIL33 mRNA，但未檢測(cè)到mIl-33 mRNA。通過(guò)ELISA分析野生型(WT)C57BL/6和純合子B-hIL33小鼠的肺研磨液，當(dāng)用LPS處理時(shí)，小鼠IL33可在野生型小鼠中檢測(cè)到，而人IL33可在純合子B-hIL33小鼠中檢測(cè)到。ND，未檢出。n=3。

B-hIL33小鼠脾臟細(xì)胞亞群分析

從C57BL/6和B-hIL33小鼠(n=3)中分離脾細(xì)胞。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定白細(xì)胞亞群的比例。如上圖所示，純合子B-hIL33小鼠白細(xì)胞亞群的比例與C57BL/6小鼠相似，表明B細(xì)胞、T細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、粒細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的分化不受hIL33人源化的影響。

B-hIL33小鼠脾臟T細(xì)胞亞群分析

從C57BL/6和B-hIL33小鼠(n=3)的脾臟中分離淋巴細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)其中T細(xì)胞亞群的比例。如上圖所示，純合子B-hIL33小鼠淋巴細(xì)胞亞群的比例與 C57BL/6小鼠相似，表明T細(xì)胞分化不受hIL33人源化的影響。 

哮喘模型示構(gòu)建及抗體評(píng)價(jià)方案

哮喘模型BALF中免疫細(xì)胞數(shù)的變化

利用B-hIL33小鼠(n=5)構(gòu)建哮喘模型并進(jìn)行給藥處理，流式檢測(cè)BALF中免疫細(xì)胞比例。結(jié)果顯示與對(duì)照組相比Etokimab Anolog給藥組嗜酸性粒細(xì)胞明顯減少。B-hIL33小鼠是評(píng)價(jià)人源IL33抗體的有力工具。

哮喘模型中IgE的產(chǎn)生

在研究終點(diǎn)時(shí)采集血清，進(jìn)行IgE水平檢測(cè)。結(jié)果顯示，接受Etokimab Anolog治療的小鼠體內(nèi)IgE水平遠(yuǎn)低于未接受治療的小鼠。

參考資料

[1] Yang F , Zhu P , Duan L , et al. IL33 and kidney disease (Review)[J]. Molecular Medicine Reports, 2016, 13(1):3-8

[2] Yasuda K , Muto T , Kawagoe T , et al. Contribution of IL-33-activated type II innate lymphoid cells to pulmonary eosinophilia in intestinal nematode-infected mice[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2012, 109(9):3451-3456.

[3] Oboki K, Nakae S, Matsumoto K, Saito H. IL-33 and Airway Inflammation. Allergy Asthma Immunol Res. 2011;3(2):81 88. doi:10.4168/aair.2011.3.2.81.

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