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植物的組織培養(yǎng)實驗

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-08-08  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):1075

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植物的組織培養(yǎng)實驗

日期:2019-08-08 / 人氣:

     今天小編帶大家了解一下植物組織培養(yǎng)的過程:

    首先根據(jù)所配培養(yǎng)基的要求,從各母液只能感取出大量元素、微量元素、鐵液、維生素、激素、蔗糖等,置于容量瓶中定容至100ml,稱取瓊脂加入400ml置于大燒杯中加熱時不斷攪拌,十分鐘后瓊脂溶解,呈透明狀即可,放置稍涼。
    然后溶解好的瓊脂溶液中加入前面所取出的各物質(zhì)及糧溶液100ml,不斷攪拌使培養(yǎng)基混合均勻。
    用PH計或試紙測PH值,用INNaOH或INNCL調(diào)至5.8。

    將配制好的培養(yǎng)基分裝于清洗干凈,烘干后的三角瓶中,培養(yǎng)基高度約1cm左右,瓊脂約在40度時才凝固,所以有充足的時間業(yè)分裝。

    將分裝好的培養(yǎng)基的三角瓶中塞上棉塞,大小要合適,然后包上牛皮紙,用橡皮盤扎緊。牛皮紙上標以記號準備滅菌。
    培養(yǎng)基的滅菌與保存。
培養(yǎng)基內(nèi)含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),有利于細菌和真菌繁殖,所以培養(yǎng)基配好后要及時滅菌,用高壓鍋滅菌注意以下幾點:
(1) 檢查鍋內(nèi)的水量,一般高度到支持鍋座水平即可。
(2) 蓋好鍋蓋,擰緊螺旋,然后檢查排氣閥是事通暢。
(3) 用煤氣灶或電爐加熱,當氣壓指針上升至6時,放一次氣或打開放氣閥,加熱至鍋內(nèi)冒出大量熱氣,以排盡鍋內(nèi)空氣。
(4) 高壓鍋內(nèi)溫度達1200C,0,1Mpa壓力時,這時保持高壓來菌20分鐘,以后切斷電源,是鍋內(nèi)壓力自然慢慢下降,也可緩緩打開放氣閥放氣,使鍋內(nèi)壓力接近于0(氣壓表指針下降至0),這時完全打開放氣閥。
(5) 打開鍋蓋,取出培養(yǎng)基、滅菌水、培養(yǎng)皿、濾紙等。滅過菌的培養(yǎng)基通常置于100C下保存,待培養(yǎng)基放置2 3天后,瓶內(nèi)水吸收干后即可使用。培養(yǎng)基滅菌后不宜久放,一般不超過一個月,多數(shù)情況滅菌后兩周內(nèi)使用完。
    接種 胡蘿卜愈傷組織的培養(yǎng)。
接種,是指經(jīng)過消素好的材料在無菌的情況下切成小塊(外植體)并放入培養(yǎng)基的過程,要在無菌的環(huán)境中進行。接種進要求無菌操作,所有接種材料要預選消毒。
    提前15分鐘將超凈工作臺打開過濾空氣。
    雙手用肥皂洗凈,以70%乙醇棉擦試一遍。
    取已洗凈的胡蘿卜5cm切段,用70%乙醇浸炮30秒。然后無菌水沖凈,再2%安替福氏浸炮15秒,無菌水沖洗3 4遍置培養(yǎng)皿中。
    在培養(yǎng)皿中用打孔器取下胡蘿卜的韌皮部切段,切去兩端,將材料切成厚3mm的薄片。
    接種,用鑷子將材料薄片迅速接入培養(yǎng)基中,在酒精燈上移動著燒一下瓶口,塞上棉花塞。

    培養(yǎng),接好種的培養(yǎng)基,放置溫度23 28℃光照1000 5000LuX,光照時間每天約16 18小時的人工氣候箱中進行培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)組織的不斷生長和細胞分裂,不久即形成愈傷組織并開始
    植株誘導和轉(zhuǎn)載
     除一些基尖,側(cè)牙球莖之類的材料能直接培養(yǎng)長大志植物外,葉,莖段,花瓣等要經(jīng)過一個脫分化和再分化的過程,才能長成植株。
     由于加入培養(yǎng)基中各種激素的比例不同,外植本可以沿著不同方向分化;一種是先由外植本產(chǎn)生愈傷組織,有愈傷組織再分化出不字根或不定芽,也可以由愈傷組織產(chǎn)生胚狀體,再發(fā)育成小植株:另一種是不經(jīng)愈傷組織,可直接誘導出胚狀全而發(fā)育成植物。
不同來源的外植體再生植株的途徑
    胡蘿卜肉質(zhì)根誘導產(chǎn)生了愈傷組織之后,需進一步轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基誘導產(chǎn)生根和芽,以獲得再生植株。
    生長點、側(cè)芽、原球莖、胚狀體根、莖段、葉、花芽、花瓣、胚狀體愈傷組織;再分化的芽和根;試管苗。


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