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Alpha -CETSA 方案：細(xì)胞水平小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗(yàn)證
點(diǎn)擊次數(shù)：10 發(fā)布日期：2019-7-25
來(lái)源：本站 僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)
小分子藥物研發(fā)中，篩選能有效結(jié)合目標(biāo)蛋白的分子是非常耗時(shí)耗（財(cái)）力的一個(gè)環(huán)節(jié)，但又是必須進(jìn)行的工作。高失敗率源于結(jié)合情況的錯(cuò)綜復(fù)雜，體外生化實(shí)驗(yàn)的結(jié)合效果，往往不能很好的在細(xì)胞水平進(jìn)行重現(xiàn)。這其中可能是因?yàn)榉肿釉诖┰郊?xì)胞膜時(shí)，出現(xiàn)了被修飾；也可能是因?yàn)榧兓鞍缀驼鎸?shí)細(xì)胞環(huán)境的蛋白構(gòu)象不同。例如，在生化水平顯示很好結(jié)合效果的分子，在細(xì)胞水平可能結(jié)合的是另一個(gè)蛋白。是不是很崩潰
試想，如果有一個(gè)高通量解決方案讓你可以直接在細(xì)胞水平進(jìn)行小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗(yàn)證，開(kāi)不開(kāi)心，意不意外？
這個(gè)方案就是Alpha -CETSA ！
什么是CETSA ？
CETSA 是細(xì)胞熱遷移實(shí)驗(yàn)（Cellular Thermal Shift Assay）的簡(jiǎn)稱，是PELAGO公司2012年在歐洲注冊(cè)的專利技術(shù)。該技術(shù)基于的原理是：每種蛋白質(zhì)都有自身的熱熔曲線（如下圖）。隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生降解（藍(lán)色曲線）；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合小分子以后，該復(fù)合蛋白的熱熔曲線會(huì)右移（紅色虛線），即相同溫度下，未降解蛋白的量會(huì)提高。CETSA 實(shí)驗(yàn)的樣品來(lái)源十分靈活，可以是細(xì)胞，也可以是活體給藥以后的組織樣本。
傳統(tǒng)的CETSA 對(duì)于天然構(gòu)象蛋白的檢測(cè)模式主要有Western-Blot和MS方法，這兩種方法都無(wú)法實(shí)現(xiàn)高通量的篩選。2019年7月，PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達(dá)成戰(zhàn)略合作協(xié)議，推出高通量，高靈敏度的CETSA HT檢測(cè)方案，即Alpha -CETSA
Alpha -CETSA 的操作
1.樣品和化合物進(jìn)行孵育。
2.進(jìn)行熱休克操作（建議在PCR儀上進(jìn)行該操作）。
3.加入合適的裂解液。
4.加入Alpha CETSA 檢測(cè)試劑。
5.在具有Alpha 功能的酶標(biāo)儀上檢測(cè)。
最新酶標(biāo)儀加載Alpha 功能
PerkinElmer公司的Victor NIVO最新款酶標(biāo)儀加載了Alpha 功能，這是目前可以開(kāi)展Alpha CETSA 檢測(cè)細(xì)胞水平蛋白-分子相互作用的最小的儀器。
目前，PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點(diǎn)試劑盒有Akt1，BCL-2，EGFR，MEK1和p38 MAKP，工具微珠2套，方便客戶靈活使用這項(xiàng)技術(shù)。更多的商品化試劑盒也會(huì)陸續(xù)推出。
點(diǎn)擊鏈接，了解更多https://www.perkinelmer.com.cn/category/alpha-CETSA-kits
關(guān)于珀金埃爾默：
珀金埃爾默致力于為創(chuàng)建更健康的世界而持續(xù)創(chuàng)新。我們?yōu)樵\斷、生命科學(xué)、食品及應(yīng)用市場(chǎng)推出獨(dú)特的解決方案，助力科學(xué)家、研究人員和臨床醫(yī)生解決最棘手的科學(xué)和醫(yī)療難題。憑借深厚的市場(chǎng)了解和技術(shù)專長(zhǎng)，我們助力客戶更早地獲得更準(zhǔn)確的洞見(jiàn)。在全球，我們擁有12500名專業(yè)技術(shù)人員，服務(wù)于150多個(gè)國(guó)家，時(shí)刻專注于幫助客戶打造更健康的家庭，改善人類生活質(zhì)量。2018年，珀金埃爾默年?duì)I收達(dá)到約28億美元，為標(biāo)準(zhǔn)普爾500指數(shù)中的一員，紐交所上市代號(hào)1-877-PKI-NYSE。了解更多有關(guān)珀金埃爾默的信息，請(qǐng)?jiān)L問(wèn)www.perkinelmer.com.cn
小分子藥物研發(fā)中，篩選能有效結(jié)合目標(biāo)蛋白的分子是非常耗時(shí)耗（財(cái)）力的一個(gè)環(huán)節(jié)，但又是必須進(jìn)行的工作。高失敗率源于結(jié)合情況的錯(cuò)綜復(fù)雜，體外生化實(shí)驗(yàn)的結(jié)合效果，往往不能很好的在細(xì)胞水平進(jìn)行重現(xiàn)。這其中可能是因?yàn)榉肿釉诖┰郊?xì)胞膜時(shí)，出現(xiàn)了被修飾；也可能是因?yàn)榧兓鞍缀驼鎸?shí)細(xì)胞環(huán)境的蛋白構(gòu)象不同。例如，在生化水平顯示很好結(jié)合效果的分子，在細(xì)胞水平可能結(jié)合的是另一個(gè)蛋白。是不是很崩潰
試想，如果有一個(gè)高通量解決方案讓你可以直接在細(xì)胞水平進(jìn)行小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗(yàn)證，開(kāi)不開(kāi)心，意不意外？
這個(gè)方案就是Alpha -CETSA ！
什么是CETSA ？
CETSA 是細(xì)胞熱遷移實(shí)驗(yàn)（Cellular Thermal Shift Assay）的簡(jiǎn)稱，是PELAGO公司2012年在歐洲注冊(cè)的專利技術(shù)。該技術(shù)基于的原理是：每種蛋白質(zhì)都有自身的熱熔曲線（如下圖）。隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生降解（藍(lán)色曲線）；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合小分子以后，該復(fù)合蛋白的熱熔曲線會(huì)右移（紅色虛線），即相同溫度下，未降解蛋白的量會(huì)提高。CETSA 實(shí)驗(yàn)的樣品來(lái)源十分靈活，可以是細(xì)胞，也可以是活體給藥以后的組織樣本。
傳統(tǒng)的CETSA 對(duì)于天然構(gòu)象蛋白的檢測(cè)模式主要有Western-Blot和MS方法，這兩種方法都無(wú)法實(shí)現(xiàn)高通量的篩選。2019年7月，PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達(dá)成戰(zhàn)略合作協(xié)議，推出高通量，高靈敏度的CETSA HT檢測(cè)方案，即Alpha -CETSA
Alpha -CETSA 的操作
1.樣品和化合物進(jìn)行孵育。
2.進(jìn)行熱休克操作（建議在PCR儀上進(jìn)行該操作）。
3.加入合適的裂解液。
4.加入Alpha CETSA 檢測(cè)試劑。
5.在具有Alpha 功能的酶標(biāo)儀上檢測(cè)。
最新酶標(biāo)儀加載Alpha 功能
PerkinElmer公司的Victor NIVO最新款酶標(biāo)儀加載了Alpha 功能，這是目前可以開(kāi)展Alpha CETSA 檢測(cè)細(xì)胞水平蛋白-分子相互作用的最小的儀器。
目前，PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點(diǎn)試劑盒有Akt1，BCL-2，EGFR，MEK1和p38 MAKP，工具微珠2套，方便客戶靈活使用這項(xiàng)技術(shù)。更多的商品化試劑盒也會(huì)陸續(xù)推出。
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關(guān)于珀金埃爾默：
珀金埃爾默致力于為創(chuàng)建更健康的世界而持續(xù)創(chuàng)新。我們?yōu)樵\斷、生命科學(xué)、食品及應(yīng)用市場(chǎng)推出獨(dú)特的解決方案，助力科學(xué)家、研究人員和臨床醫(yī)生解決最棘手的科學(xué)和醫(yī)療難題。憑借深厚的市場(chǎng)了解和技術(shù)專長(zhǎng)，我們助力客戶更早地獲得更準(zhǔn)確的洞見(jiàn)。在全球，我們擁有12500名專業(yè)技術(shù)人員，服務(wù)于150多個(gè)國(guó)家，時(shí)刻專注于幫助客戶打造更健康的家庭，改善人類生活質(zhì)量。2018年，珀金埃爾默年?duì)I收達(dá)到約28億美元，為標(biāo)準(zhǔn)普爾500指數(shù)中的一員，紐交所上市代號(hào)1-877-PKI-NYSE。了解更多有關(guān)珀金埃爾默的信息，請(qǐng)?jiān)L問(wèn)www.perkinelmer.com.cn
