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大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-06-24  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):962
 檢測(cè)試劑盒使用說明書 AE90255Ra    使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測(cè)大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用   途:用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)測(cè)定。
工作原理:
   本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平。向預(yù)先包被了大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成 
從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。  洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
 
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中
 
標(biāo)本要求 
1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 加樣:1)空白孔,空白對(duì)照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗MCP-1抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測(cè)樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗MCP-1抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50 l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.  終止:每孔加終止液50 l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。  
操作程序總結(jié):

試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
 
檢測(cè)范圍:
檢測(cè)范圍:15pg/ml-360pg/ml
 
保存條件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6個(gè)月(2-8℃)。
 
 
 
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