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??黃曲霉毒素B1是中毒性及致癌性*強(qiáng)的物質(zhì)，已導(dǎo)致嚴(yán)重的食品**問題?；ㄉ?、玉米、稻谷、小麥、花生油等糧油食品容易受黃曲霉毒素B1的污染，造成黃曲霉毒素超標(biāo)。國家質(zhì)檢總局規(guī)定，黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。
1.適用范圍
本方法適用于出口茶葉中黃曲霉毒素B1含量的檢驗(yàn)。 2.原理概要
樣品用三氯甲烷提取，提取液經(jīng)硅膠柱凈化，凈化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有熒光檢測(cè)器的有效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。 3.主要試劑和儀器
3.1.主要試劑
三氯甲烷；
正己烷；
苯；
甲醇：紫外光譜級(jí)；
乙腈：紫外光譜級(jí)；
三氟乙酸；
乙腈-水溶液（1＋1）；
三氯甲烷-甲醇溶液（95＋5）；
苯-乙腈溶液（98＋2）；
黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%；
黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取適量的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成濃度為10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液。根據(jù)需要，再配成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
3.2.儀器 LC600A梯度液相色譜儀配有熒光檢測(cè)器；
硅膠小柱； 振蕩器；? 氮吹儀； 微孔濾膜過濾器； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器； 微量注射器； 粉碎機(jī)；
離心管：5mL具塞磨口。 4.試樣的抽取與制備
4.1.抽樣方法
從整批產(chǎn)品堆垛的上下不同部位隨機(jī)抽取2.2規(guī)定的件數(shù)，逐件開啟。分別倒出全部茶葉于塑料布上，用取樣鏟從每件中各取出有代表性的樣品約500g。將所取樣品充分混勻，用四分法或分樣器逐步縮分出500g，裝入潔凈密封的樣品筒內(nèi)，加封后，標(biāo)明標(biāo)記，及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室。
4.2.試樣制備
將所取回樣品全部磨碎，通過20目篩，混勻，均分成兩份試樣，裝入潔凈容器內(nèi)，密封，標(biāo)明標(biāo)記。
4.3.試樣保存
將試樣于室溫下保存。
注：在抽樣和制樣的操作過程中，**防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。 5.過程簡述
5.1.提取
稱取試樣5.0g（**到0.1g）置于100mL具塞錐形燒瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振蕩器上提取30min，然后經(jīng)墊有玻璃纖維的漏斗過濾。收集濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的具尾管圓底燒瓶內(nèi)，并用三氯甲烷洗滌濾渣，收集濾液至約20mL。
5.2.凈化
用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將上述濾液在50℃水浴中濃縮至約1mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，注入硅膠小柱中。用2～4mL正己烷洗滌燒瓶后淋洗小柱，棄去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒鐘2滴的流速洗脫，收集洗脫液于離心管中。用氮?dú)鈨x緩緩吹干，供衍生用。
5.3.衍生
5.3.1.試樣
加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述離心管中，蓋緊磨口塞，超聲振蕩1min，靜置10min，用氮吹儀緩緩至干。用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超聲1min，用0.5μm濾膜過濾，濾液供液相色譜用。
5.3.2.標(biāo)準(zhǔn)工作溶液
取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用氮吹儀緩緩吹干，按5.3.1步驟操作。
5.4.測(cè)定
5.4.1.色譜條件
色譜柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（內(nèi)徑）；
流動(dòng)相：甲醇-水溶液（42＋58）；
流速：0.8mL/min；
熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長375 nm，發(fā)射波長425 nm；
色譜柱溫度：室溫。
5.4.2.測(cè)定
根據(jù)樣液中黃曲霉毒素B1的含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中黃曲霉毒素B1衍生物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液的衍生物溶液等體積參插進(jìn)樣測(cè)定。在上述色譜條件下，黃曲霉毒素B1衍生物保留時(shí)間約為8min。
5.4.3.空白試驗(yàn)
除不加試樣外，按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。 6.結(jié)果計(jì)算
用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 7.低限和回收率測(cè)定
7.1.低限
本方法的測(cè)定低限為0.001mg/kg。
7.2.回收率
回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：黃曲霉毒素B1的添加濃度在0.001～0.5mg/kg范圍內(nèi)，回收率為89.1%～104.9%。
本方法適用于出口茶葉中黃曲霉毒素B1含量的檢驗(yàn)。 2.原理概要
樣品用三氯甲烷提取，提取液經(jīng)硅膠柱凈化，凈化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有熒光檢測(cè)器的有效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。 3.主要試劑和儀器
3.1.主要試劑
三氯甲烷；
正己烷；
苯；
甲醇：紫外光譜級(jí)；
乙腈：紫外光譜級(jí)；
三氟乙酸；
乙腈-水溶液（1＋1）；
三氯甲烷-甲醇溶液（95＋5）；
苯-乙腈溶液（98＋2）；
黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%；
黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取適量的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成濃度為10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液。根據(jù)需要，再配成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
3.2.儀器 LC600A梯度液相色譜儀配有熒光檢測(cè)器；
硅膠小柱； 振蕩器；? 氮吹儀； 微孔濾膜過濾器； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器； 微量注射器； 粉碎機(jī)；
離心管：5mL具塞磨口。 4.試樣的抽取與制備
4.1.抽樣方法
從整批產(chǎn)品堆垛的上下不同部位隨機(jī)抽取2.2規(guī)定的件數(shù)，逐件開啟。分別倒出全部茶葉于塑料布上，用取樣鏟從每件中各取出有代表性的樣品約500g。將所取樣品充分混勻，用四分法或分樣器逐步縮分出500g，裝入潔凈密封的樣品筒內(nèi)，加封后，標(biāo)明標(biāo)記，及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室。
4.2.試樣制備
將所取回樣品全部磨碎，通過20目篩，混勻，均分成兩份試樣，裝入潔凈容器內(nèi)，密封，標(biāo)明標(biāo)記。
4.3.試樣保存
將試樣于室溫下保存。
注：在抽樣和制樣的操作過程中，**防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。 5.過程簡述
5.1.提取
稱取試樣5.0g（**到0.1g）置于100mL具塞錐形燒瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振蕩器上提取30min，然后經(jīng)墊有玻璃纖維的漏斗過濾。收集濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的具尾管圓底燒瓶內(nèi)，并用三氯甲烷洗滌濾渣，收集濾液至約20mL。
5.2.凈化
用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將上述濾液在50℃水浴中濃縮至約1mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，注入硅膠小柱中。用2～4mL正己烷洗滌燒瓶后淋洗小柱，棄去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒鐘2滴的流速洗脫，收集洗脫液于離心管中。用氮?dú)鈨x緩緩吹干，供衍生用。
5.3.衍生
5.3.1.試樣
加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述離心管中，蓋緊磨口塞，超聲振蕩1min，靜置10min，用氮吹儀緩緩至干。用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超聲1min，用0.5μm濾膜過濾，濾液供液相色譜用。
5.3.2.標(biāo)準(zhǔn)工作溶液
取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用氮吹儀緩緩吹干，按5.3.1步驟操作。
5.4.測(cè)定
5.4.1.色譜條件
色譜柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（內(nèi)徑）；
流動(dòng)相：甲醇-水溶液（42＋58）；
流速：0.8mL/min；
熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長375 nm，發(fā)射波長425 nm；
色譜柱溫度：室溫。
5.4.2.測(cè)定
根據(jù)樣液中黃曲霉毒素B1的含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中黃曲霉毒素B1衍生物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液的衍生物溶液等體積參插進(jìn)樣測(cè)定。在上述色譜條件下，黃曲霉毒素B1衍生物保留時(shí)間約為8min。
5.4.3.空白試驗(yàn)
除不加試樣外，按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。 6.結(jié)果計(jì)算
用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 7.低限和回收率測(cè)定
7.1.低限
本方法的測(cè)定低限為0.001mg/kg。
7.2.回收率
回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：黃曲霉毒素B1的添加濃度在0.001～0.5mg/kg范圍內(nèi)，回收率為89.1%～104.9%。
前。為保證統(tǒng)計(jì)準(zhǔn)確，請(qǐng)勿將同一段代碼添加到多個(gè)站點(diǎn)中。-->
前。為保證統(tǒng)計(jì)準(zhǔn)確，請(qǐng)勿將同一段代碼添加到多個(gè)站點(diǎn)中。-->
