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人維生素B3(VB3)試劑盒(ELISA)操作說(shuō)明書(shū)及性能參數(shù)——中國(guó)生物器材網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-04-25  來(lái)源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):855
 
l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人維生素B3(VB3)的含量。
l 有效期:6個(gè)月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷
 
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人維生素B3(VB3)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人維生素B3(VB3)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
 
樣本處理及要求
1.  血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000 g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000 g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000 g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。
4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000 g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
 
需要而未提供的試劑和器材
1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:4、2、1、0.5、0.25、0.125 nmol/L
2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50 L樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
 

嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。  
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20 洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20 洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 

 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 L;  樣本孔中加入待測(cè)樣本50 L;空白孔不加。  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100 L,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350 L),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。  每孔加入底物A、B各50 L,37℃避光孵育15min。  每孔加入終止液50 L,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。  
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。
 
試劑盒性能
 檢測(cè)范圍:0.125 nmol/L  4 nmol/L。  靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于0.1 nmol/L。  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。 關(guān)于訂購(gòu)詳情或技術(shù)支持,歡迎來(lái)電、來(lái)函、傳真或電郵――
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