本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)說明了如何在細(xì)胞培養(yǎng)微通道內(nèi)生長(zhǎng)貼壁細(xì)胞。將描述細(xì)胞接種，培養(yǎng)基交換和光學(xué)性質(zhì)。另外，顯示了細(xì)胞培養(yǎng)通道和標(biāo)準(zhǔn)開放孔格式之間的主要差異。   為了顯示細(xì)胞接種和 -Slide處理，使用 -Slide VI 0.4進(jìn)行演示。像通常方法一樣制備細(xì)胞懸液（例如3 105細(xì)胞/ ml）并將30 l加到通道中。將移液管尖端放在通道的入口上，并如圖所示指向通道?？焖俜峙洳⑻畛湔麄€(gè)渠道。 細(xì)胞附著后，如上圖所示，將60 l無細(xì)胞培養(yǎng)基填充到每個(gè)通道中。注意避免氣泡。如果在細(xì)胞粘附后進(jìn)行填充步驟，則不會(huì)將細(xì)胞沖洗出通道。如果您想在細(xì)胞接種后立即填充通道，請(qǐng)小心移液。
  -Slide VI 0.4在顯微鏡觀察時(shí)已充滿細(xì)胞和培養(yǎng)基。   填充 -Slide VI 0.4的Luer儲(chǔ)液孔。
 
2.培養(yǎng)基交換
a.連續(xù)介質(zhì)交換 - 推薦使用
對(duì)于連續(xù)介質(zhì)更換，首先從儲(chǔ)存器中移除舊介質(zhì)。然后，將適量的新鮮培養(yǎng)基加入一個(gè)儲(chǔ)液器中，同時(shí)從另一個(gè)儲(chǔ)液孔中吸出。小心使用細(xì)胞培養(yǎng)移液器。我們建議體積至少是通道容積的3倍。重新填充儲(chǔ)液器。
 
連續(xù)交換介質(zhì)體積為3倍的介質(zhì)。
 
b.完全的培養(yǎng)液交換 - 僅適用于昂貴的液體
 
如果僅僅更換通道內(nèi)液體，請(qǐng)先清空通道。然后，將移液管尖端放在通道入口上，并小心地將液體從通道中吸出。使用細(xì)胞培養(yǎng)移液器徹底清除所有液體。為了重新填充通道，將通道容量的新鮮介質(zhì)直接注入通道。避免產(chǎn)生氣泡。重新填充兩邊的蓄液孔。
 
完全清空通道可能導(dǎo)致重新填充后形成氣泡。
 
通道和儲(chǔ)存孔液體完全替換。
 
 
3.通道載玻片與多孔載玻片
在下面部分，我們將 -Slide VI 0.4（細(xì)胞培養(yǎng)通道）的特性與 -Slide 8孔（開放格式）進(jìn)行比較。   對(duì)于接種細(xì)胞，主要差異是結(jié)構(gòu)內(nèi)部液體的高度。兩個(gè)系統(tǒng)的小區(qū)域部分如下所示。 -Slide VI 0.4通道內(nèi)部底部和頂部之間的距離為400 m。填充的 -Slide 8孔載玻片沒有頂部結(jié)構(gòu)。在8孔載玻片里面，培養(yǎng)基約為0.3毫，通道載玻片比開放格式8孔載玻片薄7.5倍。
 
對(duì)于細(xì)胞接種，必須應(yīng)用不同的細(xì)胞密度以在表面上獲得相同量的細(xì)胞。在該示例中，目標(biāo)是接種25個(gè)細(xì)胞/單位面積。由于 -Slide 8孔內(nèi)液體的高度是7.5倍，因此應(yīng)用的細(xì)胞濃度必須低于相同的因子。
 
 
基于不同高度的液體內(nèi)部 -Slide VI 0.4和 -Slide 8孔。在上面的例子中，相同的生長(zhǎng)區(qū)域和細(xì)胞數(shù)量但不同的體積導(dǎo)致所需的細(xì)胞濃度不同。
 
 
為了獲得相當(dāng)程度的融合，我們建議使用3 ... 7 x 105細(xì)胞/ ml（ -Slide VI 0.4）和4 ... 9 x 104細(xì)胞/ ml（ -Slide 8孔）。這是兩個(gè)幾何形狀之間相同的~7.5倍。細(xì)胞粘附后，每單位面積的細(xì)胞數(shù)相同。
 
由于不同的高度，不同的細(xì)胞濃度產(chǎn)生相同等級(jí)的細(xì)胞聚合。
 
4.通道 -Slide的優(yōu)點(diǎn)
與標(biāo)準(zhǔn)開孔格式相比，通道載玻片具有很強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。
 
a.相差顯微成像效果更好
通道幾何結(jié)構(gòu)很方便使用相差顯微鏡，因?yàn)闆]有凹液面的影響，整個(gè)生長(zhǎng)區(qū)域可以用相差技術(shù)觀察。   與開放式多孔載玻片不同，通道載玻片不會(huì)干擾相差顯微鏡的光束路徑，從而獲得更好的相差效果。
 

開放式多孔培養(yǎng)板(圖a,圖b)：凹液面影響了了相差效果。只有中心部位能提供高質(zhì)量的對(duì)比度。
 
通道式載玻片(圖c,圖d)：在通道幾何結(jié)構(gòu)中，光束路徑始終對(duì)齊。整個(gè)視野都可以提供高質(zhì)量的相差顯微鏡成像。
 
 
b.細(xì)胞分布均勻
 
在通道中，因?yàn)檫吘壭?yīng)小，貼壁細(xì)胞的同質(zhì)性要好得多。
 
下面的顯微圖像，相差（a）和熒光（b）模式中顯示了開放孔（1-3）中細(xì)胞分布的不均勻性和細(xì)胞培養(yǎng)通道（4-6）中的同質(zhì)性。
  1  開放式多孔載玻片，邊緣位置成像
2  開放式多孔載玻片，隨機(jī)位置成像
3  開放式多孔載玻片，中心部分
4  通道載玻片，邊緣位置成像
5  通道載玻片，隨機(jī)位置成像
6  通道載玻片，中心位置成像