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用恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行生鮮牛乳中體細(xì)胞的測(cè)定
日期:2019-04-17 / 人氣:
用恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行生鮮牛乳中體細(xì)胞的測(cè)定1.原理 將測(cè)試的生鮮牛乳涂抹在載玻片上成樣膜,干燥、染色,顯微鏡下對(duì)細(xì)胞核可被亞甲基藍(lán)清晰染色的細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.試劑 除非另有說(shuō)明,在分析中僅使用化學(xué)純和蒸餾水。 2.1乙醇,95%。 2.2四氯乙烷(Cz Hz Cl 4) 或三氯乙烷(C zHy Cl 3) 。 2.3亞甲基藍(lán)(Ci6HisCIN3S 3H2O) 。 2.4冰醋酸(CH3COOH) 。 2.5硼酸(H3BO3)。 3.儀器 3.1顯微鏡:放大倍數(shù)x500或 1000,帶刻度目鏡、測(cè)微尺和機(jī)械臺(tái)。 3.2微量注射器:容量0.01mLc 3.3載玻片:具有外槽圈定的范圍,可采用血球計(jì)數(shù)板。 3.4水浴鍋:恒溫65℃ 5℃。 3.5水浴鍋:恒溫35℃ 5℃。 3.6電爐:加熱溫度40℃ 10℃。 3.7砂芯漏斗:孔徑 10pm。 3.8干發(fā)型吹風(fēng)機(jī)。 3.9恒溫培養(yǎng)箱:恒溫40℃~45℃。 4.染色溶液制備 在250mL三角瓶中加人54.0mL乙醇和40.0mL四氯乙烷,搖勻;在65℃水浴鍋中加熱3min, 取出后加入0.6g亞甲基藍(lán), 仔細(xì)混勻; 降溫后, 置人冰箱中冷卻至4℃;取出后,加入6.0mL冰醋酸,混勻后用砂芯漏斗過(guò)濾;裝人試劑瓶,常溫貯存。
4.1采集的生鮮牛乳應(yīng)保存在2℃~6℃條件下。若6h內(nèi)未測(cè)定,應(yīng)加硼酸防腐。硼酸在樣品中的濃度不大于0.6g/100mL,貯存溫度2℃~6℃,貯存時(shí)間不超過(guò)24h。 4.2將生鮮牛乳樣在35℃水浴鍋 中加熱5min, 搖勻后冷卻至室溫。 4.3用乙醇將載玻片清洗后,用無(wú)塵鏡頭紙擦干,火焰烤干,冷卻。 4.4用無(wú)塵鏡頭紙擦凈微量注射器針頭后抽取0.01mL試樣,用無(wú)塵鏡頭紙擦干微量注射器針頭外殘樣。將試樣平整地注射在有外圍的載玻片上,立刻置于恒溫培養(yǎng)箱中,水平放置5mmin, 形成均勻厚度樣膜。在電爐 上烤干, 將載玻片上干燥樣膜浸入染色溶液 中,計(jì)時(shí)10min, 取出后涼干。若室內(nèi)濕度大, 則可用干發(fā)型吹風(fēng)機(jī)吹干; 然后, 將染色的樣膜浸入水中洗去剩余的染色溶液,干燥后防塵保存。 5.測(cè)定 5.1將載玻片固定在顯微鏡的載物臺(tái)上,用自然光或?yàn)樵龃笸干涔鈴?qiáng)度用電光源、聚光鏡頭、油浸高倍鏡。 5.2單向移動(dòng)機(jī)械臺(tái)對(duì)逐個(gè)視野中載玻片上染色體細(xì)胞計(jì)數(shù),明顯落在視野內(nèi)或在視野內(nèi)顯示一半以上形體的體細(xì)胞被用于計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)的體細(xì)胞不得少于400個(gè)。
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