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用電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行水質(zhì)糞大腸菌群的測(cè)定

日期：2019-04-09 / 人氣：

用電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行水質(zhì)糞大腸菌群的測(cè)定
測(cè)定方法一般分為兩種，一種是多管發(fā)酵法，一種是濾膜法。下面給大家介紹一下實(shí)驗(yàn)步驟：
濾膜法
水樣量的選擇：水樣量的選擇根據(jù)細(xì)菌受檢驗(yàn)的特征和水樣中預(yù)測(cè)的細(xì)菌密度而定。如未知水樣中糞大腸菌的密度，就應(yīng)按下表所列體積過濾水樣，以得知水樣的糞大腸桿菌密度。先估計(jì)出適合在濾膜上計(jì)數(shù)所應(yīng)使用的體積，然后再取這個(gè)體積的1/10和10倍，分別過濾。理想的水樣體積是一片濾膜上生長(zhǎng)20～60個(gè)糞大腸菌群菌落，總菌落數(shù)不得超過200個(gè)。
濾膜及濾器的滅菌：將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌三次，每次15min。前兩次煮沸后需更換水洗滌2～3次，以除去殘留溶劑。也可用121 C滅菌10min，10min一到，迅速將蒸汽放出，這樣可以盡量減少濾膜上凝集的水分。濾器、接液瓶和墊圈分別用紙包好，在使用前先經(jīng)121 C高壓蒸汽滅菌30min。濾器滅菌也可用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。
過濾：用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，穩(wěn)妥地固定好濾器。將適量的水樣注入濾器中，加蓋，開動(dòng)真空泵即可抽濾除菌。
培養(yǎng)：使用M FC培養(yǎng)基。培養(yǎng)基含或不含瓊脂，不含瓊脂的培養(yǎng)基使用已用M-FC培養(yǎng)基飽和的無菌吸收墊。將濾過水樣的濾膜置于瓊脂或吸收墊表面。將培養(yǎng)皿緊密蓋好后，置于能準(zhǔn)確恒溫于44.5 C 0.5 C的電熱恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水浴中，經(jīng)24h 2h培養(yǎng)。若用恒溫水浴培養(yǎng)，則需用防水膠帶貼封每個(gè)平皿，將培養(yǎng)皿成疊封入防水塑料袋或容器內(nèi)，浸沒在44.5 C 0.5 C恒溫水浴中。在培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)，裝培養(yǎng)皿的塑料袋必須用重物墜于水面之下，以保持所需的嚴(yán)格溫度。所有已制備的培養(yǎng)物都應(yīng)在過濾后30min內(nèi)浸入水浴內(nèi)。
多管發(fā)酵法
水樣接種量將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣接種量。每個(gè)樣品至少用三個(gè)不同的水樣量接種。同一接種水樣量要有五管。相對(duì)未受污染的水樣接種量為10mL、1mL、0.1mL。受污染水樣接種量根據(jù)污染程度接種1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。
接種體積為10mL，則試管內(nèi)應(yīng)裝有三倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5mL；如接種量為1mL或少于1mL，則可接種于普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10mL中。
初發(fā)酵試驗(yàn)    將水樣分別接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中。在37 C 0.5 C電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h 2h。產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗(yàn)陽性。如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性。
復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)    輕微振蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽性結(jié)果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)或滅菌棒將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中。在44.5 C 0.5 C溫度下培養(yǎng)24h 2h（水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)基液面）。接種后所有發(fā)酵管必須在30min內(nèi)放進(jìn)水浴中。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽性

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