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細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)介紹——中國生物器材網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-04-02  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):393
體外細(xì)胞共培養(yǎng)(co-culture)是將兩種細(xì)胞(可以來自同一種組織,也可以來自不同的組織)混合共同培養(yǎng),從而使其中一種細(xì)胞的形態(tài)和功能穩(wěn)定表達(dá),并維持較長時間。該技術(shù)能模擬體內(nèi)生成的微環(huán)境,便于更好地觀察細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用以及探討藥物的作用機(jī)制和可能作用的靶點(diǎn),填補(bǔ)了單層細(xì)胞培養(yǎng)和整體動物實(shí)驗(yàn)的鴻溝。
目前主要有三方面的研究內(nèi)容:分別是a. 細(xì)胞與細(xì)胞之間的接觸、作用,引起胞質(zhì)膜的直接接觸并產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì) ECM ,其含有間質(zhì)膠原、纖連蛋白、蛋白多糖及層粘連蛋白等成分,從而模擬了與體內(nèi)相似的微環(huán)境,維持細(xì)胞的立體構(gòu)形及促進(jìn)細(xì)胞的功能。b.細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用 ,觀察細(xì)胞共培養(yǎng)后其功能、性狀和生長行為的變化 ,如某一細(xì)胞的分泌物對另外一種細(xì)胞基因表達(dá)的影響,細(xì)胞與細(xì)胞之間的 對話 等。c.研究藥物對細(xì)胞形態(tài)、功能的影響以及相關(guān)機(jī)制,為新藥研發(fā)提供重要技術(shù)支持。
細(xì)胞共培養(yǎng)分為直接接觸式共培養(yǎng)和非直接接觸式共培養(yǎng)。直接接觸式共培養(yǎng)是指在合適的條件下,將兩種細(xì)胞按照一定比例在同一培養(yǎng)皿中共同培養(yǎng)。利用兩種細(xì)胞或組織接觸,通過旁分泌、自分泌分泌細(xì)胞因子或直接接觸等相互作用方式,主要缺點(diǎn)是兩種細(xì)胞分離較困難,不便于觀察和后續(xù)檢測;非直接接觸式共培養(yǎng)是指在共培養(yǎng)體系中一者對另者的影響是通過旁分泌的細(xì)胞因子相互作用,但兩者不接觸。由于兩種細(xì)胞容易分離,便于觀察和不影響后續(xù)的檢測,包括以下4種方法:(1)用一種細(xì)胞的培養(yǎng)上清液(含有不同生長因子)與另外一種細(xì)胞共培養(yǎng)。(2)將玻片上(經(jīng)過1型膠原凝膠預(yù)處理)培養(yǎng)的細(xì)胞B,以一定的比例放入細(xì)胞A的培養(yǎng)皿中與其共培養(yǎng)。(3)Millicell插入式細(xì)胞培養(yǎng)皿(Transwell小室)是一類有通透性的杯狀裝置,杯子底層放一張有通透性的膜,一般常用的是聚碳酸酯膜,孔徑大小有 0.1~12.0um。將 Transwell 小室放入培養(yǎng)板中,細(xì)胞A種在上室內(nèi),下層種植的細(xì)胞B 其培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞,從而可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞 A 的影響。(4)三維細(xì)胞培養(yǎng)(three dimensional cell culture,TDCC):TDCC是將具有三維結(jié)構(gòu)不同材料的載體與各種不同種類的細(xì)胞在體外共同培養(yǎng),使得細(xì)胞能夠分化產(chǎn)生一定的三維組織特異性結(jié)構(gòu),構(gòu)成三維細(xì)胞載體復(fù)合物,如現(xiàn)在常用的基質(zhì)膠 (matrigel),是一種從小鼠腫瘤組織中提取的物質(zhì),在室溫下,它形成類似于體內(nèi)的細(xì)胞外基底膜的膠狀結(jié)構(gòu),把內(nèi)皮細(xì)胞培Matrigel膠內(nèi),內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出新生血管的特征。Matrigel膠方法的局限性是并不能很好模仿體內(nèi)腫瘤和血管內(nèi)皮的微環(huán)境,細(xì)胞分離及提取困難,而且細(xì)胞因子的彌散受到一定的影響。

Ibidi共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品介紹---- -Slide 2孔共培養(yǎng)
2.應(yīng)用范圍:(1)不同細(xì)胞系或原代細(xì)胞的共培養(yǎng)
(2)上皮-間質(zhì)細(xì)胞互相作用
(3)體外不同種類細(xì)胞旁分泌互相作用
(4)基質(zhì)膠中細(xì)胞或細(xì)胞球體培養(yǎng)
3. 特點(diǎn):
(1)IBIDI有2孔共培養(yǎng)載玻片,細(xì)胞互不接觸,但共享同一個液體環(huán)境,可以實(shí)時觀察細(xì)胞,不像transwell做共培養(yǎng),需要取出細(xì)胞才能觀察;
(2)IBIDI共培養(yǎng)載玻片在孔里加液換液,培養(yǎng)和觀察等操作方便,比transwell的操作要簡單;
(3)此產(chǎn)品能按實(shí)驗(yàn)需要調(diào)節(jié)供體細(xì)胞和受體細(xì)胞的比例;
(4)產(chǎn)品用法簡介:在淺的孔中種細(xì)胞,細(xì)胞貼壁后,加入培養(yǎng)基浸過所有的淺孔,共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)開始;
-(如果實(shí)驗(yàn)是做少量細(xì)胞的共培養(yǎng),或多細(xì)胞對少細(xì)胞的共培養(yǎng))IBIDI這些2孔插件,還有4孔插件都可以做,把少細(xì)胞種在插件的孔里;
4. 實(shí)驗(yàn)流程簡介
1. 將40-60ul的受體細(xì)胞懸浮液種到slide中間小室,根據(jù)你的細(xì)胞類型密度控制在5-10 104cells/ml;
2. 將40-60ul的飼養(yǎng)層細(xì)胞懸浮液種到slide的其他8個小室;
3. 細(xì)胞貼壁后,移去各小室培養(yǎng)基,并洗脫掉未貼壁細(xì)胞,再加400-600ul培養(yǎng)基到大well,兩種細(xì)胞共享同一培養(yǎng)體系。

縱切面:

 


 
 
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