改善色譜分離度
色譜分離的目標(biāo)是在最短的時間內(nèi)獲得目標(biāo)組分的足夠分離度（Rs）。

1.5的分離度可以實(shí)現(xiàn)基線分離，然而對于可以在實(shí)驗(yàn)室之間易于轉(zhuǎn)換的耐用、可重復(fù)方法而言，理想的分離度是1.8-2.0。
分離度方程告訴我們什么變量可以影響分離度：

無論哪種方式，系統(tǒng)背壓隨著N的增加而增加，因此通過增加N實(shí)現(xiàn)令人滿意的分離，其 成本 可能是極高的壓力。
同樣，增加保留值（k值）將會增加Rs，但回報(bào)率也快速下降。

將k增加至超過10通常是Rs與分析時間之間的不利權(quán)衡，因?yàn)橹挥蠷s的邊際收益隨著保留時間的增加而實(shí)現(xiàn)。

該效應(yīng)的圖形表示參見下述圖1。

圖1 N、 和k對分離度(Rs)的影響
對于典型的分離，其中：N = 10,000, k = 4, = 1.1

增加N、 或k可以提高分離度(Rs)。

然而，從這些圖中可以看出，N或k的提高都會迅速降低回報(bào)率。
另一方面，提高選擇性（ ）則沒有這個問題，因此其成為開發(fā)分離方法時的最佳優(yōu)化變量。

增加 可以增加Rs，但不同于N和k,不會受回報(bào)率下降的約束。

的變化對壓力沒有影響，對分離時間的影響也是微乎其微的（參見圖2）。

因此，在開發(fā)分離方法時， 是最重要的變數(shù)。

優(yōu)化 可以使您在所有目標(biāo)峰之間達(dá)到滿意的分離度，同時保持系統(tǒng)背壓和分離時間在可接受范圍內(nèi)。

改善色譜分離度- 選擇性或柱效？
選擇性( )由流動相、溫度和固定相化學(xué)物質(zhì)控制。大多數(shù)方法開發(fā)策略將探索所有這些色譜變量。
如果使用 標(biāo)準(zhǔn) 3 m C18相沒有達(dá)到足夠的分離度，推薦優(yōu)化分離的色譜選擇性而不是分離柱效，如下述實(shí)例所示。
通過簡單地將固定相化學(xué)物質(zhì)（即色譜柱）改變?yōu)榫哂刑娲V選擇性的固定相化學(xué)物質(zhì)，易于在標(biāo)準(zhǔn)HPLC系統(tǒng)上獲得所需分離度，而無需昂貴的UHPLC儀器。

另外，也可以避免復(fù)雜的流動相組分、升高的溫度和侵蝕性pH條件。

圖2利用選擇性實(shí)現(xiàn)快速、高分離度的分離

樣品：1）對乙酰氨基酚2）氫氯噻嗪3）甲基苯基亞砜4）甲基苯基砜5）阿司匹林6）非那西丁7）1,3-二硝基苯
8）1,2,4-三甲氧基苯9）苯甲酸乙酯10）尼美舒利11）布洛芬12）吲哚美辛13）甲芬那酸
色譜柱尺寸：50 x 2.1 mm 流速：0.60 ml/min 溫度：40 C 檢測：UV, 254 nm 流動相：A = 5 mM甲酸（溶于水中）以及B = 5 mM（溶于甲醇中），梯度= 在5分鐘內(nèi)3-100% B
比較數(shù)據(jù)不代表所有應(yīng)用。

在保持C18鍵合相的同時，將粒徑從3 m減小至2 m以下，并不能顯著改善分離效果，另外也會導(dǎo)致壓力明顯增加。
ACE C18-PFP色譜柱為3個關(guān)鍵對提供了更佳的選擇性( )，因此與2 m以下的C18色譜柱相比，其可以提供極佳的分離效果，即使2 m以下的色譜柱可以提供更高的柱效。
與使用具有高塔板數(shù)和高壓的色譜柱嘗試進(jìn)行峰分離所獲得的結(jié)果相比，利用選擇性的能力可以獲得更佳的分離效果。